4、去掉DNA中杂质,提纯DNA。
探究实验原理:
屏幕展示表格1
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NaCl2mo1/L |
NaC10.14mo1/L |
NaC10.015mo1/L |
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DNA |
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蛋白质 |
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表格2 |
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DNA |
蛋白质 |
杂质 |
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95%酒精 |
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不同浓度的NaC1溶液可溶解或析出DNA。95%酒精可提取DNA。
填表1:
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NaCl2mo1/L |
NaC10.4mo1/L |
NaC10.015mo1/L |
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DNA |
最大 |
最小 |
变大 |
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蛋白质 |
解聚 |
最大 |
变小 |
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填表2: |
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DNA |
蛋白质 |
杂质 |
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95%酒精 |
不溶 |
可溶 |
可溶 |
通过对实验原理的预习,表格的比较,使学生明确了各溶液的用途,保证理解实验。
请学生代表简述DNA提取实验步骤[实验设计一]
投影展示实验设计思路:
鸡血细胞液①aDNA 释放 ②bDNA与蛋白质的分离 ③cDNA析出④dDNA浓缩(提纯)
获得鸡血细胞核物质:提核物质→溶解→析出→溶解→析出
实验步骤:
![]()
引导学生讨论、回忆并回答目的①~⑨。
①防止血凝。
②加速血细胞破裂。
③溶解DNA。
④使2 mol/L的NaCl溶液稀释至0.14 mol/L,促DNA最大限度地析出。
⑤使含DNA的黏稠物被留在纱布上。
⑥使含DNA的黏稠物尽可能多地溶于溶液中。
⑦除去含DNA的滤液中的杂质。
⑧提取DNA。
⑨A:出现蓝色。B:无变化
讨论与结论:
投影给出如下讨论提纲,供学生讨论。
(1)DNA粗提取过程中的关键是哪几步?
(2)提取鸡血中的DNA时,为什么要除去血液中的上清液?
(3)DNA的直径约为2 nm,实验中出现的丝状物的粗细是否表示一个DNA分子直径的大小?
学生分组进行讨论并发表讨论结果。教师对讨论进行全程指导,并与学生一起归纳总结。
(1)a.提取鸡血细胞的核物质。应用低渗原理和机械搅拌,可得到最大量的DNA。
b.析出DNA黏稠物。加蒸馏水要慢,搅拌要轻。
c.沉淀DNA时,必须用冷酒精。
(2)提取DNA,去除杂质是关键。由于上清液是血液中的血浆部分,不含DNA,所以要除去(含蛋白质)。
(3)实验中出现的丝状物是肉眼可以观察到的,这种丝状物的直径要比DNA分子的直径2 nm大许多倍,所以实验中出现的丝状物并不表示一个DNA分子的直径。
实验结论:细胞中有DNA,DNA遇二苯胺试剂在沸水浴中变蓝色。
教学目标巩固