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阅读下列实验原理,分析、设计有关问题:
实验原理:
①核酸在较为剧烈的化学、物理和酶的因素的影响下很容易降解。在制备DNA时要加入DNA酶的抑制剂柠檬酸钠,以除去Mg离子,防止DNA酶的激活。
②核酸中的DNA和RNA在生物体内均以核蛋白的形式存在,DNA核蛋白在1 mol/L NaCl溶液中溶解度很大,但在0.14 mol/L NaCl溶液中的溶解度很低;而RNA核蛋白溶于0.14 mol NaCl溶液。
③用苯酚处理,可使蛋白质变性,且留在苯酚层内;在DNA溶液中加入25倍体积为95%的酒精,可将DNA分离出来。此时DNA十分粘稠,可用玻璃棒搅成团取出。
④DNA在强酸环境下,水解产生脱氧核糖等小分子物质,它与二苯胺酸性溶液反应,能生成蓝色化合物。
提供的试剂与器材:
柠檬酸钠溶液、石英砂、0.14 mol/L NaCl溶液、1 mol/L NaCl溶液、苯酚、95%酒精、二苯胺试剂、浓硫酸、花椰菜、研钵、烧杯、漏斗、玻璃棒、量筒、石棉网、酒精灯、吸管、试管等。
思考与设计:
(1)分程序设计具体的操作步骤,提取新鲜花椰菜细胞中的DNA。
(2)设计实验证明提取物确实为DNA。
查看习题详情和答案>>(2)步骤二:过滤后收集含有DNA的___________。
(3)步骤三、四的操作原理是____________,步骤四通过向溶液中加入________调节NaCl溶液物质的量浓度为_______mol/L时,DNA将会析出,过滤去除溶液中的杂质。
(4)步骤七:向步骤六过滤后的______中,加入等体积的冷却的_______________,静置2~3min,溶液中会出现_______色丝状物,这就是粗提取的DNA。
(5)步骤七:DNA遇____________试剂,沸水浴5min,冷却后,溶液呈___________色。
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下图示以鸡血为实验材料进行DNA的粗提取与鉴定的操作程序,请分析回答:
(1)步骤一中,向鸡血细胞液中加入________并搅拌,可使鸡血细胞破裂。
(2)步骤二:过滤后收集含有DNA的________。
(3)步骤三、四的操作原理是________,步骤四通过向溶液中加入________调节NaCl溶液物质的量浓度为________mol/L时,DNA将会析出,过滤去除溶液中的杂质。
(4)步骤七:向步骤六过滤后的________中,加入等体积的冷却的________,静置2-3 min,溶液中会出现________色丝状物,这就是粗提取的DNA。
(5)步骤七:DNA遇________试剂,沸水浴5 min,冷却后,溶液呈________色。
以下是有关DNA粗提取实验的材料:
A.核酸极不稳定,在较为剧烈的化学、物理因素和酶的作用下很容易降解。在制备
DNA时要加入DNA酶的抑制剂——柠檬酸钠,以除去Mg,防止DNA酶的激活。
B.核酸中的DNA和RNA在生物体内均以核蛋白的形式存在,DNA核蛋白在1 mol/L
NaCl溶液中溶解度很大,但在0.14 mol/L NaCl溶液中的溶解度很低;而RNA核
蛋白溶于0.14 mol/L NaCl溶液。
C.用苯酚处理,可使蛋白质变性,且留在苯酚层内;在DNA溶液中加入2.5倍体积、
浓度为95%的酒精,可将DNA分离出来;此时DNA十分黏稠,可用玻璃棒搅成
团取出。
D.DNA在强酸环境下,水解产生脱氧核糖等小分子物质,它与二苯胺酸性溶液反应,
能生成蓝色化合物。
E.实验材料与器械:柠檬酸钠溶液、石英砂、0.14 mol/L NaCl溶液、1 mol/L NaCl
溶液、蒸馏水、苯酚、95%酒精、二苯胺试剂、浓硫酸、花椰菜、研钵、烧杯、
漏斗、玻璃棒、量筒、石棉网、酒精灯、吸管、试管等。
F.实验步骤:研磨的匀浆→过滤的滤液→滤液稀释6倍→离心处理的沉淀物→沉淀物
再溶解→加苯酚静置后去上清液→提取出DNA→DNA鉴定。
据以上材料回答下列问题:
(1)研磨时,取10 g花椰菜,加入适量的石英砂、________和________。
(2)将滤液稀释6倍,其目的是__________________________________________。
(3)取沉淀物,置于2 mL 1 mol/L NaCl溶液中,使DNA核蛋白再次溶解,再加入2 mL
苯酚充分震荡后静置,待其分层后弃其上层的苯酚。该步骤的目的是除去________。
(4)如何将剩余溶液中的DNA提取出来?
(5)如何证明提取物是DNA分子?
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