8．某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。请回答与此实验相关的问题。

(1)培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了________和________。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是________和________。

(2)对培养基进行灭菌，应该采用的方法是______________。

(3)为了使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种________作为对照进行实验。

(4)培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有________种细菌。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越________。

(5)如果要检测水中是否含有大肠杆菌，培养基中还应加入________。

[解析]　(1)蛋白胨可提供氮源、碳源、维生素，而淀粉可提供碳源，除此之外，微生物的生长还需要无机盐和水。

(2)对培养基的灭菌，在实验室内常用高压蒸汽灭菌法。

(3)在实验的过程中，除实验变量以外其他各变量均应适宜且相同，以利于更好地实现实验目的。

(4)不同的菌落具有各自的菌落特征(如形状、颜色、大小、隆起程度等)。

(5)培养基中加入某种试剂，以鉴别某种微生物是否存在，称为鉴别培养基。大肠杆菌用伊红-美蓝鉴别。

[答案]　(1)氮源(碳源不作要求)　碳源　水　无机盐(后两空顺序可颠倒)　(2)高压蒸汽灭菌　(3)无菌水　(4)多　大(或严重)　(5)伊红-美蓝

7．(2010年南京质检)甲、乙、丙是三种微生物，下表Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ是用来培养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在Ⅲ中正常生长繁殖；甲能在Ⅰ中正常生长繁殖，而乙和丙都不能；乙能在Ⅱ中正常生长繁殖，甲、丙都不能。下列说法正确的是(　)

注：“+”表示培养基中加入了这种物质，“－”表示培养基中没有加入这种物质。

A．甲、乙、丙都是异养型微生物

B．甲、乙都是自养型微生物，丙是异养型微生物

C．甲是异养型微生物、乙是固氮微生物、丙是自养型微生物

D．甲是固氮微生物、乙是自养型微生物、丙是异养型微生物

[解析]　Ⅰ培养基缺少N素， Ⅱ培养基缺少有机物，Ⅲ营养全面。N是微生物生长的必需元素，每一种微生物正常生长都需要N，但自己能够固氮的微生物可以生活在无氮培养基上。甲能在Ⅰ上生长繁殖，而乙、丙都不能，说明甲是能够固氮的微生物；乙能在Ⅱ中生长繁殖，甲、丙不能，说明乙不需要培养基为它的正常生命活动提供能源物质，乙一定为自养型微生物，甲、丙一定都为异养型微生物。

[答案]　D

6．分离纤维素分解菌的实验过程中操作有误的是(　)

A．经选择培养后将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上

B．富集培养这一步可省略；但培养纤维素分解菌少

C．经稀释培养后，用刚果红染色

D．对照组可用同样量的培养液涂布到不含纤维素的培养基上

[解析]　　 经选择培养后，再经稀释，才能将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上；富集培养可省略；经稀释培养后，用刚果红染色，设置对照能证明经富集培养的确得到了欲分离的微生物。

[答案]　A

5．产生标准菌落的最初数目和培养基分别是(　)

A．同种少数细菌，液体培养基

B．许多细菌，液体培养基

C．同种少数细菌，固体培养基

D．许多细菌，固体培养基

[解析]　　 在液体培养基中生活的细菌，无论是一个还是许多，肉眼都是不可见的。在固体培养基上的细菌，当数目较少时也是不可见的。当固体培养基上有许多细菌并且集中在较小范围时，肉眼可见。而菌落是一个细菌或几个细菌的子细胞群体，形成于固体培养基上，有一定的形态结构，所以肉眼可见。同种细菌形成的菌落，形态结构是相同的。如果有许多细菌形成的菌落，就不可能有比较标准的形态，因为这许多细菌第一不可能是同一种细菌，第二不可能在培养基的同一个点上。

[答案]　C

4．某同学在10¹、10²、10³倍稀释液的平均菌落数为2 760、295和46，则菌落总数(个/mL)为(　)

A．2.76×10⁴　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 B．2.95×10⁴

C．4.6×10⁴　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 D．3.775×10⁴

[解析]　菌落计数法，注意是计算不同稀释度的平均菌落数。首先选择平均菌落数在30-300之间的，当只有一个稀释倍的平均菌落数符合此范围时，则以该平均菌落乘以稀释倍数即为该样品的细菌总数；若有两个稀释倍的平均菌落数均在30-300之间，则按两者菌落总数之比值来决定，若比值小于2应采取两者的平均数，若大于2，则取其中较小的菌落总数。本题295、46在30-300之间，46×10³与295×10²比值为1.6。应取二者平均数(46×10³+295×10²)÷2＝3.775×10⁴。若所有稀释倍数的菌落数均不在30-300之间，则应以最接近300或30的平均菌落乘以稀释倍数。

[答案]　D

3．下列为某同学在培养金黄色葡萄球菌实验中的部分操作步骤，其中正确的是(　)

A．培养基中蛋白胨、牛肉膏溶化后，直接补充蒸馏水至100 mL

B．用1 mol/L NaOH调试pH，使pH为5.0-6.0

C．加压至98 kPa之前，要彻底排出锅内的冷空气

D．将接种环放在酒精灯上灼烧，灭菌后立即伸入菌种试管内挑取少量菌种

[解析]　A选项应该先加水，后加热溶化，否则培养基会被烧焦；B选项用1 mol/L NaOH调试pH是正确的，但金黄色葡萄球菌是细菌，本实验应把pH调7.4-7.6；C选项加压至98 kPa之前，要彻底排出锅内的冷空气，是为了使高压锅能够在很短的时间内达到较高的温度，使锅内充满水蒸气，并使水蒸气分子运动达到尽可能快的速度，穿透各微生物菌体及芽孢等；D选项接种环放在酒精灯上灼烧灭菌是应该的，但不能立即伸入菌种试管内，这样会烫死菌种。

[答案]　C

2．关于配制培养基的叙述中，正确的是(　)

A．制作固体培养基必须加入琼脂

B．加入青霉素可得到放线菌

C．培养自生固氮菌不需氮源

D．发酵工程一般用半固体培养基

[解析]　固体培养基需加入凝固剂，琼脂是常用的，但不是唯一的，青霉素可抑制细菌和放线菌的生长，发酵工程一般用液体培养基。自生固氮菌能够将空气中的氮还原成氨，故配制培养基时不需加氮源。

[答案]　C

1．下列有关微生物营养物质的叙述，正确的是(　)

A．是碳源的物质不可能同时是氮源

B．碳源都能提供能量

C．除水以外的无机物只能提供无机盐

D．无机氮源也能提供能量

[解析]　　 A、B选项的表达不完整。有的碳源只能是碳源，如CO₂，有的碳源可以同时是氮源，如NH₄HCO₃，有的碳源可以同时是能源，如葡萄糖，有的碳源可以同时是氮源和能源；如蛋白胨。C选项中，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样，如CO₂为自养型微生物的碳源，NaHCO₃可作为自养型微生物的碳源和无机盐，而NaCl则只能提供无机盐。D选项中，无机氮源提供能量的情况是存在的，如NH₃可以为硝化细菌提供能量和氮源。

[答案]　D

9．如下图是泡菜的制作及测定亚硝酸盐含量的实验流程示意图，请据图回答：

(1)制作泡菜宜选用新鲜的蔬菜或其他原料，原因是____________________。

(2)制备泡菜的盐水中清水与盐的质量比为______，盐水需煮沸并冷却后才可使用，原因是______________；试说明盐在泡菜制作中的作用_________________________________

________________________________________________________________________。

(3)泡菜风味形成的关键在于____________的加入。

(4)发酵过程中应定期测定亚硝酸盐的含量，原因是______________________

________________________________________________________________________。

(5)测定亚硝酸盐含量的方法是_________________________________________。

(6)若探究不同食盐浓度对亚硝酸盐含量变化的影响①选择的实验材料最好是红萝卜还是白萝卜，理由是___________________________________________________________

________________________________________________________________________。

②在进行实验时分三组，除了实验材料的质量相同外，还要保证每组泡菜的________相同。

[答案]　(1)亚硝酸盐的含量低

(2)4∶1　加热煮沸是为了杀灭杂菌，冷却之后使用是为了保证乳酸菌等微生物的生命活动不受影响　盐有灭菌、析出蔬菜中过多的水以及调味的作用

(3)调味料

(4)发酵不同时期亚硝酸盐的含量会发生变化，及时检测是为了把握取食泡菜的最佳时机

(5)比色法

(6)①白萝卜。避免植物中色素对显色反应的干扰

②制作条件

8．(2010年山东潍坊质检)腐乳是我国古代劳动人民创造出的一种经过微生物发酵的大豆食品。下面是腐乳制作的流程示意图：

→→→

(1)现代科学研究表明，许多种微生物参与了豆腐的发酵，其中起主要作用的是毛霉。毛霉是一种________状真菌。

(2)腐乳制作的原理是________________________________________。

(3)传统的制作过程中，豆腐块上生长的毛霉来自______________。而现代的腐乳生产是在严格的无菌条件下，将优良的毛霉菌种接种在豆腐上，这样可以____________________。

(4)加盐的作用是____________和____________。

(5)卤汤是由酒及各种香辛料配制而成的，卤汤中的酒可以选用料酒、黄酒、米酒、高粱酒等，含量一般控制在12%左右。加酒的作用是____________和____________。

[解析]　(1)豆腐发酵有多种微生物参与，其中毛霉起主要作用，毛霉是一种丝状真菌。

(2)毛霉等微生物产生的蛋白酶将豆腐中的蛋白质分解成小分子肽和氨基酸，脂肪酶将脂肪水解为甘油和脂肪酸。在多种微生物的协同作用下，豆腐转变成腐乳。

[答案]　(1)丝　(2)毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸，脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸　(3)空气中的毛霉孢子　避免其他菌种的污染，保证产品的质量　(4)析出豆腐中的水分，使豆腐变硬　抑制微生物的生长，避免豆腐变质　(5)可以抑制微生物的生长　能使腐乳具有独特的香味