3．在已知某小片段基因碱基序列的情况下，获得该基因的最佳方法是(　)

A．用mRNA为模板逆转录合成DNA

B．以4种脱氧核苷酸为原料人工合成

C．将供体DNA片段转入受体细胞中，再进一步筛选

D．由蛋白质的氨基酸序列推测mRNA

解析：在已知某小片段基因碱基序列的情况下，获得该基因的最佳方法是以4种脱氧核苷酸为原料，人工合成目的基因；以mRNA为模板逆转录合成DNA是获得真核生物目的基因的常用方法；将供体DNA片段转入受体细胞中，再进一步筛选，检测目的基因是否进入受体细胞。

答案：B

2．已知某种限制性内切酶在一线性DNA分子上有3个酶切位点，如上图中箭头所指。如果该线性DNA分子在3个酶切位点上都被该酶切断，则会产生a、b、c、d四种不同长度的DNA片段。现有多个上述线性DNA分子，若在每个DNA分子上至少有1个酶切位点被该酶切断，则从理论上讲，经该酶酶切后，这些线性DNA分子最多能产生长度不同的DNA片段种类数是(　)

A．3　 　　　　　 B．4 　　　　　 C．9　 　　　　　 D．12

解析：限制性内切酶具有专一性，据题干信息可知，三个切点都是该酶的切点，若线性DNA分子在三个切点都被切断，则得a、b、c、d；有一个切点被切断，得ab、cd，或abc、d，或a、bcd；有两个切点被切断，得a、b、cd，若ab、c、d，或a、bc、d。因此，共得到不同长度的DNA片段有9种。

答案：C

1．科学家在培育抗虫棉时，经过了许多复杂的过程和不懈的努力，才获得成功。起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体质粒中，然后导入棉花的卵裂中，结果抗虫基因在棉花体内没有表达。然后在插入抗虫基因的质粒中插入启动子(抗虫基因首端)，导入棉花卵裂，长成的棉花植株还是没有抗虫能力。科学家又在有启动子、抗虫基因的质粒中插入终止子(抗虫基因末端)，导入棉花卵裂，结果长成的植株有抗虫能力。由以上过程推知，作为重组载体应具备的结构是(　)

A．目的基因、启动子

B．目的基因、终止子

C．目的基因、启动子、终止子

D．目的基因、启动子、终止子、标记基因

解析：基因表达载体的构建是基因工程的基本步骤也是核心，其目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。重组载体组成应有：目的基因、启动子、终止子和标记基因。

答案：D

线性DNA分子的

酶切示意图

11．下面两幅图分别是单克隆抗体制备过程和克隆羊培育过程示意图，请据图回答下列问题：

(1)图甲和图乙所示的过程中，都必须用到的动物细胞工程技术手段是________。

(2)图甲中②过程常在________诱导下完成，④过程与体外培养相比，其优点是__________________。

(3)单克隆抗体能定向攻击癌细胞，主要是利用其______________。

(4)若不考虑环境因素影响，克隆羊的性状全部像白面绵羊吗？________。原因是__________________________________________________。

(5)图乙过程的技术具有多种用途，但是不能(　)

A．有选择地繁殖某一性别的家畜

B．繁殖家畜中的优良个体

C．用于保存物种

D．改变动物的核基因

(6)在现有技术条件下，还不能将从动物体内分离出来的成熟的体细胞直接培养成一个新个体，而是必须将体细胞的细胞核移植到去核的卵细胞中才能发育成新个体，你认为原因最可能是(　)

A．卵细胞大，便于操作

B．卵细胞含有的营养物质多

C．卵细胞的细胞质可使体细胞核全能性得到表达

D．重组细胞才具有全能性

答案：(1)动物细胞培养　(2)聚乙二醇(或灭活的病毒，离心、振动、电激也可)　不需特定的培养基，不需严格的外界环境条件 　(3)导向作用　(4)不是　卵细胞细胞质的遗传物质也能控制某些性状　(5)D　(6)C

10．(2010·华南师大附中模拟)生物工程技术为人们获得需要的生物新品种或新产品提供了便利。请据图回答下列问题：

(1)在培育转人生长激素基因牛的过程中，①过程需要的工具酶是______________，②过程常用的方法是________。③过程培养到桑椹胚或囊胚阶段，可以采用________技术，培育出多头相同的转基因犊牛。

(2)prG能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，Ⅰ最可能是________细胞，Ⅱ代表的细胞具有________________________的特点。

(3)从免疫的小鼠脾脏细胞中获取B淋巴细胞，在诱导剂的作用下与骨髓瘤细胞融合，形成________，然后通过体内培养或体外培养都可以生产单克隆抗体。单克隆抗体与普通血清抗体相比较，具有________的特点。

(4)在抗虫棉培育过程中，④过程中的受体细胞采用愈伤组织细胞与采用叶肉细胞相比较，其优点是________________，⑤过程采用的技术是________。

答案：(1)限制酶、DNA连接酶　显微注射法　胚胎分割移植　(2)浆(或效应B)　既能无限增殖又能产生特定抗体　(3)杂交瘤细胞　特异性强、灵敏度高　(4)全能性高　植物组织培养

9．(2009·海口模拟)科学家对鼠杂交瘤抗体进行改造，生产出效果更好的鼠-人嵌合抗体，用于癌症治疗。下图表示形成鼠-人嵌合抗体的过程。请据图回答：

(1)生产单克隆抗体一般不直接培养浆细胞，主要原因是________________________。

(2)将________注入小鼠体内，从小鼠脾脏中获得淋巴细胞，其中至少1个淋巴细胞能产生该抗原的抗体。

(3)在单克隆抗体制备过程中之所以选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，是因为它们融合后的杂交瘤细胞具有________、________的特性。

(4)单克隆抗体制备过程运用了________和________的动物细胞工程技术手段。

(5)动物细胞培养液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素等，与植物细胞培养基有所不同的是，还含有________。

(6)在动物细胞融合过程中，需要将所选取的组织细胞离散开，以利于细胞融合，可用________处理离体组织细胞使之分散开。

(7)鼠源杂交瘤抗体与普通血清抗体相比较，具有________的特点。

(8)改造鼠源杂交瘤抗体，生产鼠-人嵌合抗体，属于________(生物工程)的范畴。图示过程是根据预期的________，设计________，最终必须对________进行操作。

(9)经过改造的鼠-人嵌合抗体，与鼠源杂交瘤抗体相比较，突出的优点是________________________________________________________________________。

解析：(1)由于浆细胞没有无限增殖的能力，因此不能通过培养浆细胞生产单克隆抗体。(2)单克隆抗体制备时，需要先把抗原注入小鼠的体内，刺激其产生浆细胞，然后从小鼠的脾脏中把浆细胞分离出来，与骨髓瘤细胞融合成杂交瘤细胞；(3)杂交瘤细胞具有无限增殖的特性，也具有合成抗体的能力；(4)单克隆抗体制备过程中使用了动物细胞融合、动物细胞培养等技术；(5)动物细胞培养液中，必须有动物血清；(6)用胰蛋白酶可以把动物组织分散成单个细胞；(7)单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高的特性；(8)从图中看改造鼠源杂交瘤抗体，生产鼠-人嵌合抗体，属于蛋白质工程的范畴；(9)鼠-人嵌合抗体的优点是副作用减少。

答案：(1)浆细胞不能无限增殖　(2)抗原　(3)在体外大量繁殖　产生特异性抗体　(4)动物细胞融合　动物细胞培养　(5)动物血清　(6)胰蛋白酶　(7)特异性强、灵敏度高　(8)蛋白质工程　嵌合抗体功能　嵌合抗体的结构　基因　(9)对人体的不良反应(或过敏反应等副作用)减少

8．(2010·黄山模拟)自然界中有一种含有叶绿体的原生动物--眼虫，这说明植物的细胞器同样可以在某些动物细胞中存活。某同学提出问题：“动物细胞与植物细胞之间可以实现杂交吗？”他尝试设计出下列具体的实验方案。

结合实验方案回答：

实验原理：根据眼虫的特点，动物细胞和植物细胞之间在理论上是可以实现杂交的。实验步骤如下：

(1)①中选的植物材料细胞中，必须有的细胞器是________。

(2)③过程所用的酶是______________________________________________________。

(3)④过程除了用电激之外，还可以用________、________等作为诱导因素。

(4)⑤过程动物细胞体外培养需要满足的条件是________、________、________、________。

(5)在整个实验过程中，要强调所用的器械的灭菌和无菌操作，原因是各种杂菌可以在培养基上面迅速生长，培养基一旦被污染，迅速生长的各种杂菌不但会和________争夺营养，而且这些杂菌生长的过程中会生成大量________导致培养物迅速死亡。

(6)在⑤⑥过程中，通常要添加血清，原因是________________________。

解析：(1)根据题意知，所选植物材料中必须含有叶绿体。

(2)图中③是去除植物细胞细胞壁的过程，所运用的酶是纤维素酶和果胶酶。

(3)诱导细胞融合的因素除了电激外，还有振动、离心、聚乙二醇、灭活的病毒等。

(4)图中⑤是动物胚胎细胞培养，此过程需要满足以下条件：无菌、无毒的环境，合适的营养、温度和pH以及气体环境。

(5)整个实验过程中，都是严格无菌的，否则各种杂菌会在培养基中生长，与所培养的细胞争夺营养，同时杂菌代谢也可能会产生出对培养物有毒的物质，导致培养物死亡。

(6)动物细胞培养过程中需要加入血清或血浆，因为动物细胞生长过程中需要一些未知天然成分，而血清、血浆中含有一些天然成分。

答案：(1)叶绿体　(2)纤维素酶和果胶酶

(3)灭活的病毒　聚乙二醇　振动　离心(任写两种)

(4)无菌、无毒的环境　合适的营养　温度和pH　气体环境

(5)培养物　对培养物有害的物质

(6)人们对细胞所需的营养物质还没有完全搞清楚，通常加入血清、血浆等一些天然成分

7．回答下列有关动物细胞培养的问题：

(1)在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面________时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的______。此时，瓶壁上形成的细胞层数是________。要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来，需要用酶处理，可用的酶是________。

(2)随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停止，进而出现__________________的现象；但极少数细胞可以连续增殖，其中有些细胞会因遗传物质发生改变而变成________细胞，该种细胞的黏着性________，细胞膜表面蛋白质(糖蛋白)的量________。

(3)现用某种大分子染料，对细胞进行染色时，观察到死细胞被染色，而活细胞不染色，原因是____________________________________。

(4)检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目，最好选用细胞分裂到________期的细胞用显微镜进行观察。

(5)在细胞培养过程中，通常在________条件下保存细胞。

解析：在动物细胞培养过程中，细胞会表现出接触抑制现象，此时是单层细胞。用胰蛋白酶可以使贴壁细胞从瓶壁上分离开来。随着细胞传代培养代数的增多，绝大部分细胞分裂停止，进而出现衰老甚至死亡的现象，但极少数细胞可以连续增殖，有些细胞会因遗传物质改变而变成不死性细胞。由于活细胞的膜具选择透过性，大分子染料不能进入活细胞内，而死细胞的细胞膜丧失选择透过性，大分子染料能够进入死细胞内而着色。由于细胞分裂中期染色体形态固定、数目清晰，因此最好选用细胞分裂到中期的细胞用显微镜观察染色体数目。由于在冷冻或超低温、液氮下，细胞中酶的活性降低，细胞新陈代谢的速率降低，通常在此条件下保存细胞。

答案：(1)相互接触　接触抑制　单层(或一层)　胰蛋白酶　(2)衰老甚至死亡　不死性　降低　减少　(3)由于活细胞的膜具有选择透过性，大分子染料不能进入活细胞内，故活细胞不能着色(或由于死细胞的膜丧失了选择透过性，大分子染料能够进入死细胞内而着色)　(4)中　(5)冷冻(或超低温、液氮)

6．(2010·潍坊模拟)野生马铃薯品种的植株具有较强的抗病、抗虫、抗盐碱、抗寒能力，但块茎不能食用。俄、德、芬兰专家共同做实验研究，用野生马铃薯与马铃薯的体细胞进行杂交，培育出了生活能力强的杂交系马铃薯。据图分析回答问题：

(1)①过程植物细胞原生质体的分离需经过酶解，其中“酶解”所用的酶应该包括____________。

(2)②过程需要用聚乙二醇(PEG)，其目的是__________________。

(3)请用文字和箭头表示出④⑤技术过程的实验流程__________________。由此过程可以看出植物细胞有形成再生组织的可能性，这是________的表现。

(4)一般在培养基上培养24-48小时后，大部分原生质体已再生出细胞壁。可以取样，通过________实验来鉴别细胞壁是否已经再生。

(5)请说明运用此植物体细胞杂交法的最大的好处：______________________。

解析：去壁应用纤维素酶和果胶酶，诱导融合可用聚乙二醇。④-⑤表示植物组织培养。检验是否再生细胞壁，可利用质壁分离与复原实验。

答案：(1)纤维素酶和果胶酶　(2)诱导原生质体融合

(3)杂交细胞愈伤组织胚状体―→幼苗植物细胞全能性　(4)质壁分离与复原　(5)可克服远缘杂交不亲合的障碍

5．关于单克隆抗体的生产和应用，错误的是(　)

A．对小动物注射特定抗原以获取所需的B细胞

B．融合并筛选特定的杂交瘤细胞，原代培养产生遗传物质改变后才能进行传代培养

C．特定的单克隆抗体可制成试剂，用于检测人体是否受某种抗原的感染

D．治疗癌症的“生物导弹”原理之一是利用单克隆抗体的特异性识别癌细胞

解析：单克隆抗体的制备是用骨髓瘤细胞和经过免疫的B淋巴细胞融合后得到杂交瘤细胞，杂交瘤细胞既具有骨髓瘤细胞无限增殖的能力，又具有B淋巴细胞产生抗体的特点，所以不需经过遗传物质的改变便能无限增殖；单克隆抗体最广泛的应用是作为诊断试剂；如果把抗癌细胞的单克隆抗体与放射性同位素、化学药物或细胞毒素相结合，制成“生物导弹”，注入体内，借助单克隆抗体的导向作用，将药物带到癌细胞所在位置，在原位就能将癌细胞杀死。

答案：B