3．实验注意事项

2．4 水浴法：将微型离心管依次在95℃、55℃、72℃的恒温水浴锅中循环处理相应时间。

2．3 按照PCR反应体系配方配制反应液；

(2)将PCR反应体系50μL用微量移液器转移到微量离心管(0.5mL)中；

(3)将微量离心管放到PCR仪中；

(4)设置PCR仪的工作参数。

(5)DNA在PCR仪中大量扩增。

2．2 实验操作步骤

2．1 PCR反应体系：缓冲液、DNA模板，四种脱氧核苷酸原料、热稳定DNA聚合酶、两种RNA引物，水

1．3DNA分子复制的人工控制

解开螺旋：在80-100℃时，DNA双螺旋打开，形成两条DNA单链，称为变性。

恢复螺旋：在50℃左右时，两条DNA单链重新形成双螺旋结构，称为复性。

复制条件：缓冲液,DNA模板,四种脱氧核苷酸,热稳定DNA聚合酶,两种引物。

反应场所：PCR仪(自动温度周期性调节)。

［思考］缓冲液相当细胞内的什么成分？(核基质)1．4PCR的反应过程

变性：在95℃时DNA解旋

复性：在50℃时引物与DNA单链结合

延伸：在72℃时合成DNA子链(两个引物间的序列)2．实验操作

1．2细胞内DNA复制过程

(1)DNA的反向平行结构：(结合投影图)

核苷酸分子的结构与方向性：(分子结构模式图)

由核苷酸通过3,5-磷酸二酯键连接形成核苷酸长链：(模式图，体现方向性)。

DNA双螺旋结构的反向平行结构：

(2)DNA的复制过程:

解　　 旋：解旋酶、ATP，DNA两条链打开，，形成两条DNA单链。

引物结合：在DNA单链3’端与DNA反向配对结合，确保引物3’端与DNA单链准确配对。

DNA聚合酶结合：

子链合成：DNA聚合酶从引物3’端开始，将配对的脱氧核苷酸连接起来。

后续加工：DNA聚合酶I将引物切去，并合成空缺处的DNA单链，再由DNA连接酶将不连续的DNA子链连接起来(半不连续合成。先导链，滞后链)

子链合成特点：不能从头合成；合成方向为“5’→3’合成”。

感悟生命的神秘：DNA聚合酶不但能够催化磷酸二酯键的形成，还具有校对功能。它在每引入一个核苷酸后都要复查一次，只有碱基配对无误后才能继续往下聚合，它不能从头合成。RNA聚合酶没有校对功能，因此RNA的合成不需要引物，而是从头合成的，它的错配可能性较大，在RNA引物完成功能后即被DNA聚合酶I删去，代之以高保真的DNA链。

［思考］DNA分子能准确复制的原因有哪些？

DNA双螺旋结构提供模板；碱基互补配对；DNA聚合酶的复查功能。

［思考］细胞内哪些物质是从头合成的？RNA合成、蛋白质合成。

1．1细胞内DNA复制条件分析：

1．基础知识

PCR技术扩增DNA的过程，与细胞内DNA复制过程类似：

在现代生物技术中，DNA技术可谓是尖端技术。人类基因组计划、基因工程、基因诊断、基因检测、古生物鉴定等都离不开对DNA分子碱基序列的分析。而分析DNA碱基序列，就需要一定量的DNA片段。怎样迅速获得足够量的DNA片段呢？今天我们来研究学习DNA分子的扩增技术――PCR技术。