1．观察类实验

在此类实验中常综合运用显微观察技术、染色技术、玻片标本制作技术等。归类如下：

6．限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是-G↓GATCC-，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是-↓GATC-。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。

①请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。

②请画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端。

③在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来？为什么？

5．将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗，饲喂转基因马铃薯可使动物获得免疫力。以下是与植物疫苗制备过程相关的图和表。

请根据以上图表回答下列问题。

(1)在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，其最主要的特点是　　　　　　　　　　　　　 。

(2)PCR过程中退火(复性)温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。表1为根据模板设计的两对引物序列，图2为引物对与模板结合示意图。请判断哪一对引物可采用较高的退火温度？__________。

(3)图1步骤③所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求？　 。

(4)为将外源基因转入马铃薯，图1步骤⑥转基因所用的细菌B通常为　　　　　　　 。

(5)对符合设计要求的重组质粒T进行酶切，。假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图1中标示的酶切位点和表2所列的识别序列，对以下酶切结果作出判断。

①采用EcoRⅠ和PstⅠ酶切，得到_________种DNA片断。

②采用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切，得到_________种DNA片断。

4．苏云金杆菌(Bt)能产生具有杀虫能力的毒素蛋白。下图是转Bt毒素蛋白基因植物的培育过程示意图(为抗氨苄青霉素基因)，据图回答下列问题。

(1)将图中①的DNA用HindIII、BamH I完全酶切后，反应管中有　　 种DNA片段。

　 (2)图中②表示HindIII与Bam I酶切、DNA连接酶连接的过程，此过程可获得 　　　种重组质粒；如果换用BstI与BamHI酶切，目的基因与质粒连接后可获得　　　 种重组质粒。　　

(3)目的基因插入质粒后，不能影响质粒的　　　　　　　　　 　。

　 (4)图中③的Ti质粒调控合成的vir蛋白，可以协助带有目的基因的T-DNA导人植物细胞，并防止植物细胞中　　　　 对T-DNA的降解。

　 (5)已知转基因植物中毒素蛋白只结合某些昆虫肠上皮细胞表面的特异受体，使细胞膜穿孔，肠细胞裂解，昆虫死亡。而该毒素蛋白对人类的风险相对较小，原因是人类肠上皮细胞　　 　。

　(6)生产上常将上述转基因作物与非转基因作物混合播种，其目的是降低害虫种群中的　　　 基因频率的增长速率。

3．下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，圈l、圈2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

(1)一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有　 　　个游离的磷酸基团。

　 (2)若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越　 　　　。

　 (3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SrnaⅠ切割，原因是　 　　　　　。

　 (4)与只使用EcoRI相比较，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止　 　　　　　　　　　　。

　 (5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入　 　　　　　　酶。

　 (6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了　 　　　　　　　　　　　。[ZXX

　 (7)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在　 　　　　　　　　的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。

2.为了解基因结构，通常选取一特定长度的线性DNA分子，先用一种限制酶切割，通过电泳技术将单酶水解片段分离，计算相对大小；然后再用另一种酶对单酶水解片段进行降解，分析片断大小。下表是某小组进行的相关实验。

(1) 该实验设计主要体现了__________________原则。

(2) 由实验可知，在这段已知序列上，A酶与B酶的识别序列分别为______个和_____个。

(3) 根据表中数据，请在下图中标出相应限制性酶的酶切位点并注明相关片断的大小。

(4) 已知BamHⅠ与BglⅡ的识别序列及切割位点如右图所示，用这两种酶和DNA连接酶对一段含有数个BamHⅠ和BglⅡ识别序列的DNA分子进行反复的切割、连接操作，若干循环后“AGATCC//TCTAGG”和______________序列明显增多，该过程中DNA连接酶催化_________键的形成。

1.图为某种质粒表到载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点,ampR为青霉素抗性基因，tctR 为四环素抗性基因，P启动子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。　 据图回答：

(1)将含有目的基因的DNA与质粒该表达载体分别用EcoRI酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有　　　　　 、

　　　　　　　　　　　　 、　　　　　　　　　　 三种 。若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　。

(2)用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是　　　　

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 .

(3)在上述实验中，为了防止目的基因和基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是　　　　　　　　 。

25．下表是基因工程中有关基因操作的名词及对应的内容，正确的组合是 　

24．用限制酶切割一个DNA分子，获得一个目的基因时，被水解的磷酸二酯键有

　　 A．1个　　 　　　　　 B．2个　　 　　　　　 C．3个　　 　　　　　 D．4个

50.用DNA连接酶把被限制性核酸内切酶Ⅰ(识别序列和切点

　 是－↓GATC－)切割过的质粒和被限制酶Ⅱ(识别序列和切

　 点是－G↓GATCC－)切割过的目的基因连接起来后，该重组

　 DNA分子如右图所示，该重组DNA分子能够再被限制酶Ⅱ

　 切割开的概率是(　 )

A．1/2　　　　　 　B．7/16　　 　　　C．1/16