12.回答下列有关“DNA的粗提取与鉴定”实验的问题。

(1)下列有关“DNA的粗提取与鉴定”实验原理的叙述正确的是　　　　　　 (　)

A.DNA在NaCl溶液中的溶解度随NaCl溶液浓度的降低而减小

B.利用DNA不溶于酒精的性质，可除去细胞中溶于酒精的物质而得到较纯的DNA

C.DNA是大分子有机物，不溶于水而溶于某些有机溶剂

D.在沸水中，DNA遇二苯胺会出现紫色反应

(2)由于鸡血较难找到，某学生试图用猪血代替，结果没有成功，其原因最可能是(　)

A.操作方法不对　　　　　　　 B.猪血含DNA太少[

C.NaCl溶液浓度太高　 　　　　　　D.加二苯胺太少

(3)下图为该实验过程中的一些重要操作示意图：

①正确的操作顺序是　　　　　　　　　　　　　　　 　。

②上图C、E步骤都加入蒸馏水，但其目的不同，分别是　　　

和　　　　。

③上图A步骤中所用酒精必须经过　　才能使用，该步骤的目的是　　　 　　　　　 　　　　　 　　　　　 　　　　　 　　　　　　 。

④为鉴定A中所得到的丝状物的主要成分为DNA，可滴加　　试剂，沸水浴，如果出现　　则该丝状物的主要成分为DNA。

解析：本实验是利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同而实现对DNA的粗提取与提纯。实验成功的关键条件之一是选材。一般用鸡血细胞而不用哺乳动物的红细胞(无核)。鉴定的原理是DNA与二苯胺反应呈现蓝色。答案：(1)B　(2)B　(3)①C→B→E→D→A　②使血细胞吸水涨破裂　降低NaCl溶液的浓度，使DNA析出　③充分预冷　提取含杂质较少(或较纯净)的DNA　④二苯胺　蓝色

11.(2010·郑州模拟)我国科研人员发现，弯曲的蚕丝由于弯折处易断裂，其强度低于由蜘蛛纺绩器拖牵丝的直丝，并首次在世界上通过了用转基因方法将“绿色荧光蛋白基因”与“蜘蛛拖牵丝基因”拼接后成功插入蚕丝基因组中，并在受体细胞中得到成功表达。

(1)在这项“基因工程”的操作中，目的基因是　　　　　，采用绿色荧光蛋白基因的主要目的是　　　　　。

(2)两基因组合在导入受体细胞前必须进行的步骤是：将其与由细菌体内取得的　　　　　进行切割处理，以保证有相同的　　　　，并拼接成　　　。如果引入的受体细胞是细菌，还要对细菌作　　　处理。

解析：从题目提供的信息不难看出，蜘蛛纺绩器拖牵丝的直丝强度比蚕丝要大，所以拖牵丝基因是目的基因。绿色荧光蛋白基因是作为标记基因。在形成重组DNA时，首先用同一种限制性核酸内切酶切割目的基因和质粒，得到相同的黏性末端，再用DNA连接酶形成重组质粒，如果重组质粒导入细菌体内，必须对细菌细胞壁用氯化钙处理，增加其通透性，便于重组质粒进入细菌体内。

答案：(1)拖牵丝基因　作为标记(基因)　(2)质粒　黏性末端　重组质粒(或重组DNA)　CaCl₂(或提高膜的通透性)

9(2010·启东质检)为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。

(1)如图甲，获得耐盐基因后，构建重组DNA分子所用的限制性内切酶作用于图中的　　处，DNA连接酶作用于　　处。(填“a”或“b”)

(2)将重组DNA分子导入水稻受体细胞的常用方法有农杆菌转化法和　　法。

(3)由导入目的基因的水稻细胞培养成植株需要利用　　技术，该技术的核心是　　　　。

(4)为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的　　作探针进行分子杂交检测，又要用　　的方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。

(5)如图乙是该耐盐基因表达过程中的一个阶段，图中3和4的核苷酸种类是否相同？　　。说明理由　　　　　　　　　　　。

解析：植物组织培养技术是将目的基因导入受体细胞后培养成植株需要用到的技术，该过程的核心是脱分化和再分化。基因工程的检测包括目的基因是否导入受体细胞的检测和目的基因是否表达成功的检测。图乙表示的是转录过程，3所在的是转录产物--RNA，基本组成单位是核糖核苷酸，4所在的是DNA的一条链，基本组成单位是脱氧核糖核苷酸。

答案：(1)a　a

(2)基因枪　(3)植物组织培养　脱分化(去分化)和再分化

(4)耐盐基因(目的基因)　一定浓度盐水浇灌(移植到盐碱地中)

(5)不同　3是核糖核苷酸，4是脱氧核糖核苷酸

10.科学家将人的生长激素基因与大肠杆菌的DNA分子进行重组，并成功地在大肠杆菌中得以表达但在进行基因工程的操作过程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是-G?GATCC-，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是-?GATC-，据图回答：

(1)过程①表示的是采取　　的方法来获取目的基因。

(2)根据图示分析，在构建基因表达载体过程中，应用限制酶　　切割质粒，用限制酶　　切割目的基因。用限制酶切割目的基因和运载体后形成的黏性末端通过　　原则进行连接。

(3)人的基因之所以能与大肠杆菌的DNA分子进行重组，原因是　　　　　。

(4)人体的生长激素基因能在细菌体内成功表达是因为　　　　　　　。写出目的基因在细菌中表达的过程　　　　　　　　　　。

(5)将得到的大肠杆菌B涂布在一个含有氨苄青霉素的培养基上，能够生长的说明已导入了　　　　，反之则没有导入。

解析：根据图示分析可知目的基因插在了质粒中含抗四环素基因的部位，而该位置有限制酶Ⅰ的识别位点，因此在构建基因表达载体过程中，应用限制酶Ⅰ切割质粒；而目的基因的两侧均含有能被限制酶Ⅱ识别的碱基序列，所以用限制酶Ⅱ切割目的基因，露出两端的黏性末端。用限制酶切割目的基因和运载体后形成的黏性末端通过碱基互补配对原则进行连接。人的基因之所以能与大肠杆菌的DNA分子进行重组，是因为人的基因与大肠杆菌DNA分子的双螺旋结构相同。人体的生长激素基因能在细菌体内成功表达是因为人和细菌共用一套(遗传)密码子；目的基因导入细菌中表达的过程为：生长激素基因转录mRNA翻译生长激素。将得到的大肠杆菌B涂布在一个含有氨苄青霉素的培养基上，能够生长的，说明已导入了普通质粒或重组质粒，因为普通质粒或重组质粒中都含抗氨苄青霉素基因。

答案：(1)反转录(人工合成)　(2)Ⅰ　Ⅱ　碱基互补配对　(3)人的基因与大肠杆菌DNA分子的双螺旋结构相同　(4)共同一套(遗传)密码子　生长激素基因转录　

mRNA翻译生长激素　(5)普通质粒或重组质粒(缺一不可)

8.下图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”的示意图。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因。判断下列说法正确的是　　　 (　)

A.将重组质粒导入细菌B常用的方法是显微注射法

B.将完成导入过程后的细菌涂布在含有氨苄青霉素的培养基上，能生长的只是导入了重组质粒的细菌

C.将完成导入过程后的细菌涂布在含有四环素的培养基上，能生长的就是导入了质粒A的细菌

D.目的基因成功表达的标志是受体细胞能在含有氨苄青霉素的培养基上生长

解析：将目的基因导入到细菌细胞中常用的方法是Ca²⁺处理法；基因必须保持结构的完整性才能得以表达，而抗氨苄青霉素基因结构完整，能够表达而使细菌具有对氨苄青霉素的抗性，在含有氨苄青霉素的培养基上能存活的是导入了质粒A或导入了重组质粒的细菌；由于将人的生长激素基因导入到质粒的抗四环素基因上，破坏了抗四环素基因的完整性，导入了重组质粒的细菌也没有对四环素的抗性，在含有四环素的培养基上不能存活，能存活的是导入质粒A的细菌。目的基因成功表达的标志是受体细胞产生出人的生长激素。

答案：C

7.下列关于基因工程的叙述，正确的是　　　　 　　　　　　　　　　　　　　(　)

A.基因工程经常以抗菌素抗性基因为目的基因

B.细菌质粒是基因工程常用的运载体

C.通常用一种限制性核酸内切酶处理含目的基因的DNA，用另一种处理运载体DNA

D.为培育成抗除草剂的作物新品种，导入抗除草剂基因时只能以受精卵为受体

解析：基因工程经常以抗菌素抗性基因为标记基因；质粒是基因工程常用的运载体；通常用同一种限制酶切割目的基因和运载体，以获得相同的黏性末端；受体细胞可以是受精卵，也可以是体细胞。

答案：B

6.下列关于基因工程及其应用的叙述正确的是　　　　　　　　　　　　　　　 (　)

A.若要生产转基因抗病水稻，可先将目的基因导入大肠杆菌中，再转入水稻细胞

B.用氨基酸序列推测合成的目的基因与原基因的编码区中的外显子一致

C.用DNA探针能检测饮用水中重金属物质的含量

D.作为运载体要有多种限制酶的切点，但对一种限制酶而言，最好只有一个切点

解析：转基因植物的培育中转入外源基因常用农杆菌转化法、基因枪法等；由于每种氨基酸可由不同的密码子决定，因此，用氨基酸序列推测合成的目的基因与原基因的编码区中的外显子不一定相同；DNA探针能检测饮用水中病毒，由于作用原理是DNA分子杂交，因此对重金属无效；运载体有多种限制酶切点以便与外源基因结合，一种限制酶只有一个切点，才能确保结合的精确。

答案：D

5.(2010·烟台质检)科学家将β­干扰素基因进行定点突变导入大肠杆菌表达，使干扰素第十七位的半胱氨酸，改变成丝氨酸，结果大大提高了β­干扰素的抗病毒活性，并且提高了储存稳定性。该生物技术为　　　　　　　　　　　　　　　　　　 (　)

A.蛋白质工程 　　　　　B.基因工程

C.基因突变　　　　　 　D.细胞工程

解析：基因工程是通过对基因的操作，将符合人们需要的目的基因导入适宜的生物体，使其高效表达，从中提取所需的基因控制合成的蛋白质，或表现某种性状，蛋白质产品仍然为天然存在蛋白质，而蛋白质工程却是对控制蛋白质合成的基因进行改造，从而实现对其编码的蛋白质的改变，所得到的已不是天然的蛋白质。题目中的操作中涉及的基因显然不再是原来的基因，其合成的β­干扰素也不是天然β­干扰素，而是经过改造的，是具人类所需优点的蛋白质，因而整个过程利用的生物技术为蛋白质工程。

答案：A

4.质粒是基因工程中最常用的运载体，它存在于许多细菌体　　　

内。质粒上有标记基因如图所示，通过标记基因可以推知　

外源基因(目的基因)是否转移成功。外源基因插入的位置

不同，细菌在培养基上的生长情况也不同，下表是外源基

因插入位置(插入点有a、b、c)，请根据表中提供的细菌生

长情况，推测①②③三种重组后细菌的外源基因插入点，正确的一组是　　 (　)

A.①是c；②是b；③是a

B.①是a和b；②是a；③是b

C.①是a和b；②是b；③是a

D.①是c；②是a；③是b

解析：对①细菌来说，能在含青霉素的培养基上生长，也能在含四环素的培养基上生长，说明抗青霉素基因和抗四环素基因没有被破坏，插入点是c；对②细菌来说，能在含青霉素的培养基上生长，说明其抗青霉素基因正常，不能在含四环素的培养基上生长，说明其抗四环素基因被破坏，插入点应为b；对③细菌来说，不能在含青霉素的培养基上生长，说明其抗青霉素基因被插入而破坏，故插入点为a。

答案：A

3.近年来基因工程的发展非常迅猛，科学家可以用DNA探针和外源基因导入的方法进行遗传病的诊断和治疗，下列做法中不正确的是　　　　　　　　　　　　 (　)

A.用DNA探针检测镰刀型细胞贫血症

B.用DNA探针检测病毒性肝炎

C.用导入外源基因的方法治疗半乳糖血症

D.用基因替换的方法治疗21三体综合征

解析：镰刀型细胞贫血症是由于基因突变引起的疾病，用β­珠蛋白的DNA探针可以检测到；用DNA探针也可以很方便地检测出肝炎患者的病毒；半乳糖血症是由于体内缺少半乳糖苷转移酶，将带有半乳糖苷转移酶的基因导入半乳糖血症患者的体内，可以治疗这种疾病；21三体综合征是由于患者多了一条21号染色体，不能用基因替　　

换的方法治疗。

答案：D

2.限制酶是一种核酸内切酶，可识别并切割DNA分子上特定的核苷酸序列。下图为四种限制酶BamHⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ和BglⅡ的识别序列和切割位点

BamHⅠ　　EcoRⅠ　　HindⅢ　BglⅡ

　 ↓　　　↓　　↓ 　　↓

GGATCC　　GAATTC　AAGCTT　AGATCT

CCTAGG　　CTTAAG　TTCGAA　TCTAGA

　　 ↑　　 　↑　　　 ↑　　↑

切割出来的DNA黏性末端可以互补配对的是　　　　　　　 　　　　　　　(　)

A.BamHⅠ和EcoRⅠ　　　B.BamHⅠ和HindⅢ

C.BamHⅠ和BglⅡ　 　　　　　D.EcoRⅠ和HindⅢ

解析：只有黏性末端相同才可互补，BamHⅠ和BglⅡ切出的末端相同。

答案：C