(一)制片技术--制片法 1.玻片标本类型: (1)临时玻片标本:是实验中观察标本常采用的方法,保存时间不长久是本法的缺点。如草履虫形态及应激性、口腔上皮细胞、植物细胞质壁分离及复原、洋葱根尖有丝分裂、病原体观察等。(2)永久玻片标本:如洋葱根尖固定装片.蛔虫受精卵固定装片等。 2.制片法:中学常用的四种制片法是石蜡切片法(如制作植物茎横断面的切片),涂片法(如制作细菌、酵母菌、口腔上皮细胞临时装片),压片法(洋葱根尖有丝分裂、观察早期花蕾花粉母细胞、洋葱鳞片叶表皮等临时装片的制作),徒手切片法(如桂花叶片横切)。 (二)染色及染色剂:染色的目的在于使生物组织和细胞受染色剂的作用(化学反应或主动吸收等),其各部分结构能清楚的显示出来,便于显微镜下识别和分析研究。 1.染料及染色剂 (1)染料:是一类有色的有机物或无机物,它能使被染物呈现颜色。染料的分类有两种,一种是按染料发色机团是阴离子还是阳离子分,是阴离子者为酸性染料,是阳离子者为碱性染料。碱性染料是一种色碱盐,通常为氯化物(如亚甲基蓝)或醋酸盐(醋酸洋红);酸性染料为色酸盐,通常是钠盐、钾盐、铵盐。另一种是按染色对象分为胞核染料(龙胆紫、醋酸洋红),胞浆染料(红墨水、碘液等),脂肪染料(苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ)等。 (2)染色剂:染料溶解在溶剂中而成的溶液。如碘液、醋酸洋红液、龙胆紫溶液、亚甲基蓝溶液、红墨水等。 2.染色方法:根据材料是活的还是死的分为活体或半活体染色(如0.01%亚甲基蓝溶液对根染色--根对离子的交换吸附实验、碘液对口腔上皮细胞的染色等)及死体染色(如根尖有丝分裂实验中龙胆紫溶液对已解离的根尖的染色)。 3.生物实验中常用的溶液:水、酒精、丙酮、汽油等。 4.介绍几种制剂的作用 (1)2,4-D生长素类似物:有双重性,低浓度促进生长;高浓度抑制生长;培育无籽果实。 (2)10-4M的秋水仙素:a.诱发基因突变。b.使染色体加倍,培育多倍体。c. 单倍体育种,培育纯种。 (3)0.9%生理盐水(维持红细胞、口腔上皮细胞形态),10%KNO3溶液(植物细胞质壁分离和自动复原),5%CaCl2溶液和0.01%亚甲基蓝溶液(根对离子的交换吸附),15%盐酸溶液(对根尖解离),丙酮、酒精(溶解色素),层析液(分离色素),龙胆紫溶液、醋酸洋红液(根尖细胞染色体染色),30%蔗糖溶液(植物细胞质壁分离和复原) (4)紫外线:一定剂量作为能量、保温,高剂量导致细胞基因突变。 (三)实验方法:是做好实验设计的关键所在,最常见的经典的实验方法汇总如下: (1)化学物质的检测方法 1) 淀粉--碘液   2) 还原糖--斐林试剂、班氏试剂   3) CO2 --Ca(OH)2溶液或酸碱指示剂或溴麝香草酚蓝水溶液(蓝变绿再变黄)  4) 乳酸--pH试纸  5) O2--余烬木条复燃  6) 无O2--火焰熄灭  7) 蛋白质--双缩脲试剂  8) 染色体--龙胆紫、醋酸洋红溶液  9) DNA--二苯胺试剂(沸水浴蓝色)或甲基绿  10) 脂肪--苏丹Ⅲ或苏丹IV染液  11)酒精--重铬酸钾(酸性条件)12)RNA--吡罗红  13)线粒体--健那绿

(2) 实验结果的显示方法 1)光合速率--O2释放量或CO2吸收量或淀粉产生量   2)呼吸速率--O2吸收量或CO2释放量或淀粉减少量   3)原子途径--放射性同位素示踪法    4)细胞液浓度大小--质壁分离 5)细胞是否死亡--质壁分离、亚甲基蓝溶液染色   6)甲状腺激素作用--动物耗氧量,发育速度等 7)生长激素作用--生长速度(体重变化,身高变化)8)胰岛素作用--动物活动状态 9)菌量--菌落数或亚甲基蓝溶液褪色程度      10)大肠杆菌--伊红-美蓝琼脂培养基 (3) 实验条件的控制方法 1)增加水中氧气--泵入空气或吹气或放入绿色植物减少水中氧气--容器密封或油膜覆盖或用凉开水 2)提供CO2方法--NaHCO3      3)除去容器中CO2--NaOH溶液或KOH溶液 

4)除去叶片中原有淀粉--置于黑暗环境一昼夜  5)除去叶片中叶绿素--酒精加热

6)除去光合作用对呼吸作用的干扰--给植株遮光  7)如何得到单色光 --棱镜色散或彩色薄膜滤光

8)血液抗凝--加入柠檬酸钠  9)线粒体提取--细胞匀浆离心    10)骨的脱钙--盐酸溶液 11)灭菌方法--微生物培养的关键在于灭菌,对不同材料,灭菌方法不同:培养基用高压蒸汽灭菌;接种环用火焰灼烧灭菌;双手用肥皂洗净,擦干后用75%酒精消毒;整个接种过程都在实验室无菌区进行。

(4)实验中控制温度的方法 1)还原糖鉴定:水浴煮沸加热        2)酶促反应:水浴保温 3)用酒精溶解叶中的叶绿素:酒精要隔水加热 4)DNA的鉴定:水浴煮沸加热 5)细胞和组织培养以及微生物培养:恒温培养

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