2．加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？

答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。

[疑难点拨]

1．为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？

答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA。

以血液为实验材料时，每100ml血液中需要加入3g　　　　 ，防止　　　　 。

加入洗涤剂后，动作要　　　 、　　　　 ，否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤地操作。加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要　　　 ，以免　　　　　　　 ，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。

二苯胺试剂要　　　　　 ，否则会影响鉴定的效果。

1)实验材料的选取　 凡是含有　　 的生物材料都可以考虑，但是使用　　　　　　 的生物组织，成功的可能性更大。在下面的生物材料中选取适合的实验材料：

鱼卵、猪肝、菜花(花椰菜)、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基的大肠杆菌

2)破碎细胞，获取含DNA的滤液　 动物细胞的破碎比较容易，以鸡血细胞为例，在鸡血细胞液中加入一定量的　　　 ，同时用　　 搅拌，过滤后收集滤液即可。如果实验材料是植物细胞，需要先用　　　　 溶解细胞膜。例如，提取洋葱的DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的　　　　 和　　　　 ，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。

3)去除滤液中的杂质　

4)DNA的析出与鉴定　　

将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积　　　　 、冷却的　　 ，静置　　　　 ，溶液中会出现　　　　　　 ，这就是粗提取的DNA。用玻璃棒　　　　 搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分。

取两支20ml的试管，各加入物质的量浓度为　　　　　 的NaCl溶液5ml，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4ml的　

　　　　　 。混合均匀后，将试管置于　　　　　 中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变　　　 。

提取生物大分子的基本思路是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。对于DNA的粗提取而言，就是要利用　　　　　　 、　　　　 　　等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。

1)DNA的溶解性　 DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的　　　　　 中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使　　　　 充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。

此外，DNA不溶于　　　　 溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步的分离。

2)DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性　 蛋白酶能水解　　　　　 ，但是对　　　 没有影响。大多数蛋白质不能忍受60-80^oC的高温，而DNA在　　　　 以上才会变性。洗涤剂能够瓦解　　　 ，但对DNA没有影响。

3)DNA的鉴定　　 在　　　　　　 条件下，DNA遇　　　　　 会被染成　　　 色，因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。

(二)观察发酵的葡萄糖溶液

利用固定的酵母细胞发酵产生酒精，可以看到产生了很多　　　 　，同时会闻到　　　 　

补充：直接使用酶、固定化酶和固定化细胞催化的优缺点：

[疑难点拨]

1．细胞的活化。

提示：在缺水的状态下，微生物会处于休眠状态。活化就是让处于休眠状态的微生物重新恢复正常的生活状态。酵母细胞所需要的活化时间较短，一般需要0.5-1小时。

2．如何检验凝胶珠的质量是否合格。

提示：检验凝胶珠的质量是否合格，可以采用以下方法。一是用镊子夹起一个凝胶珠放在实验桌上用手挤压，如果凝胶珠不破裂，没有液体流出，就表明凝胶珠的制作成功。二是在实验桌上用力摔打凝胶珠，如果凝胶珠很容易弹起，也表明制备的凝胶珠是成功的。

3．酶和细胞分别适应哪种固定方法？

提示：一般来说，酶更适合采用化学结合和物理吸附法固定，而细胞多采用包埋法固定化。这是因为细胞个大，而酶分子很小；个大的难以被吸附或结合，而个小的酶容易从包埋材料中漏出。

[典例解析]

酶和细胞分别适应哪种固定方法？

提示：一般来说，酶更适合采用化学结合和物理吸附法固定，而细胞多采用包埋法　　　　　　　　　　　 固定化。这是因为细胞个大，而酶分子很小；个大的难以被吸附或结合，而个小的酶容易从包埋材料中漏出。

《DNA的粗提取与鉴定》

(一)观察凝胶珠的颜色和形状

如果制作的凝胶珠颜色过浅、呈白色，说明　　　　　　　　　　　　　　　　　　 ；如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆形，则说明　　　　　　 ，制作失败，需要再作尝试。

(二)用固定化酵母细胞发酵

1.将固定好的酵母细胞用　　　 　　　　冲洗2-3次。

2.发酵时的温度就为　　　　 　　　，时间　　　 　　　　。

(一)制备固定化酵母细胞

制备固定化酵母细胞需要的材料是　　　 　　、　　 　　　　、　　　 　　　、　　 　　　　、

　　　 　　　　、　　 　　　　、　　　　　 　、　　　　 、 　　　　　和　　 　　　

1.酵母菌的活化

活化就是处于　　　　 　状态的微生物重新恢复正常的生活状态。

2.配制物质的量尝试为0.05mol/L的CaCl₂溶液

3.配制海藻酸钠溶液

加热溶化海藻酸钠时要注意：　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　

4.海藻酸钠溶液与酵母菌细胞混合

5.固定化酵母细胞

以恒定的速度缓慢地将注射器中的溶液滴加到配制好的　　　　 　　　　　　　溶液中，并浸泡　　　　 　(时间)。

固定化酶和固定化细胞是利用　　 　　　或　　　 　　

方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术，包括　 　　　　、　　　　 和　　　 　　　法。

一般来说，酶更适合采用　　　　　 和　　　　 法固定，而细胞多采用　　 法固定化。这是因为细胞个大，而酶分子很小；个大的细胞难以被　　　 或　　　 ，而个小的酶容易从　　　　 中漏出。

包埋法法固定化细胞即将微生物细胞　　　　 　包埋在不溶于水的　　　　　　　 　中。常用的载体有　　　　　 、　　　　 、　　　　　 、　　　　　 和　 　　　　等。