3．目的基因与运载体结合(以质粒为运载体)

3．获取目的基因的方法

从基因文库中获取

鸟枪法

人工合成

2．原核细胞的基因结构与真核细胞的基因结构的异同点

1．外显子与内含子

一般来说，结构基因都是由外显子和内含子组成，但是，外显子和内含子的关系不是完全固定不变的。有时同一条DNA链上的某一段DNA序列，当它作为编码某多肽链的基因时是外显子，而作为编码另一多肽链的基因时，则是内含子，结果是同一基因可以同时转录为两种或两种以上的mRNA。

1、2 基因工程的基本操作程序

课标要求

简述基因工程的原理和技术

能力要求

(1)通过对书中插图、照片等的观察，学会科学的观察方法，培养观察能力。

(2)通过对基因工程的基本操作程序的学习，使学生在理解步骤的同时，举一反三，对于其他基因工程操作实例做到能理解、能介绍，从而培养学生对相关知识的理解能力及良好的语言表达能力。

(3)通过引导学生在网上的探究活动，引导学生主动参与，乐于探究，培养学生收集和处理科学信息的能力、获取新知识的能力、分析和解决问题的能力及交流与合作的能力。

知识网络体系

　　　　　　　　　　　 目的基因：指编码蛋白质结构基因

　　　　　　　　　 　 　基因文库

　　　　　　　　　　 　　从基因文库中获取　　　 基因组文库

目的基因的获取　　 方法　　　　　　　　 　 　　 部分基因文库

　　　　　　人工合成

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 PCR：是一项在生物体外复制特定

　　　　　　　　DNA片段的核酸合成技术。

利用PCR技术扩增目的基因　 目的：获取大量的目的基因

原理：DNA复制

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 过程

目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可以遗传给下一代，

基因表达载体的构建　　　 并使目的基因能够表达和发挥作用。

(基因工程的核心)　　　　　　　　　　　　 目的基因：

基因表达载体的组成：　 启动子：

　　　　　　　　　　 终止子：

　　　　　　　　　　 标记基因：

　　 转化：目的基因进入受体细胞内并在受体细胞内维持稳定

和表达的过程

农杆菌转化法

导入植物细胞的方法： 基因枪法

将目的基因导入受体细胞　 方法：　　　　　　　　　　　　 花粉通道法

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 导入动物细胞的方法： 显微注射技术

　　　　　　　　　　　　　　　　　　 导入微生物的方法：

　　　　　　　 　　　　　　　检测转基因生物的染色体上是否插入了目的基因

　　　　　　　　　　 检测：　　 方法：分子杂交技术(DNA探针+转基因生物DNA)

目的基因的检测和鉴定　　　　 检测目的基因是否转录

　　　　　　　　　　　　　　　 方法：分子杂交技术(DNA探针+转基因生物mRNA)

检测目的基因是否翻译成蛋白质　　　　　　　　　　　　　　　

　　　　　　　　　　　　　　　 抗原-抗体杂交

　　　　　　　　　　　 鉴定：对生物进行个体水平的鉴定

重难热点归纳

提取目的基因的方法

目的基因导入受体细胞的途径。

知识拓展

2、(05天津理综)限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是-G^↓GATCC-，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是-^↓GATC-。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有一个酶Ⅱ的切点。

(1)请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。

(2)请画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端。

(3)在DNA连接酶作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接？为什么？

1.番茄在运输和贮藏过程中，由于过早成熟而易腐烂。应用基因工程技术，通过抑制某种促进果实成熟激素的合成，可使番茄贮藏时间延长，培育成耐贮藏的番茄新品种。这种转基因番茄已于1993年在美国上市，请回答： 　(1)促进果实成熟的重要激素是　　 　　。

(2)在培育转基因番茄的操作中，所用的基因的“剪刀”是　　　　 　　，基因的“针线”是　　　　　 　　，基因的“运输工具”是　　　　。 　(3)与杂交育种、诱变育种相比，通过基因工程来培育新品种的主要优点是　　　、　　 　　　和　　　　　　　　　　　　　 　　　。

14．(05全国Ⅰ)镰刀型细胞贫血症的病因是血红蛋白基因的碱基序列发生了改变。检测这种碱基序列改变必须使用的酶是

A. 解旋酶　　　 B. DNA连接酶 　　　C. 限制性内切酶　　　 D、RNA聚合酶

创新应用训练

13．(2006深圳一模考题)研究人员想将生长激素基因通过质粒介导入大肠杆菌细胞内，以表达产生生长激素。已知质粒中存在两个抗性基因：A是抗链霉素基因，B是抗氨苄青霉素基因，且目的基因不插入到基因A、B中，而大肠杆菌不带任何抗性基因，则筛选获得“工程菌”的培养基中的抗抗生素首先应该

A、仅有链霉素　　　 　 　　　　　　　B、仅有氨苄青霉素

　C、同时有链霉素和氨苄青霉素　　　　 　D、无链霉素和氨苄青霉素

12．在基因工程中通常所使用的质粒是

　A、细菌的染色体DNA　 　　B、细菌染色体外的DNA

　C、病毒染色体DNA　　　　 　D、噬菌体DNA