6.(2009年镇江模拟)豇豆对多种害虫具有抗性，根本原因是豇豆体内具有胰蛋白酶抑制剂基因(CpTI基因)。科学家将其转移到水稻体内后，却发现效果不理想，主要原因是CpTI蛋白质的积累量不足。经过在体外对CpTI基因进行修饰后，CpTI蛋白质在水稻中的积累量得到了提高。修饰和表达过程如图所示：

请根据以上材料，回答下列问题：　

(1)CpTI基因是该基因工程中的　　　　　 基因，“信号肽”序列及“内质网滞留信号”序列的基本组成单位是　　　　　　　　　　 ，A物质的基本单位是　　　　　　　　　　 ，在①过程中，首先要用　　　　　　 酶切开，暴露出　　　　　　 ，再用　　　　　 酶连接。　

(2)在该基因工程中，供体细胞来自　　　　　　　 ，若受体细胞是水稻的体细胞，应如何进行操作才能获得抗虫水稻　　　　　　　　　　　　　　　　 。此外，还常用水稻的　　　　　 作受体细胞。　

(3)②过程称为　　　　　 。　

(4)检测修饰后的CpTI基因是否表达的最好方法是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

　答案 (1)目的 (四种)脱氧核苷酸 (四种)核糖核苷酸 限制性内切　 黏性末端　 DNA连接　

(2)豇豆　 将体细胞进行组织培养　 受精卵　

(3)转录　

(4)让多种害虫食用水稻叶片

5.(2008年广州模拟)胰岛素是治疗糖尿病的重要药物。如图是利用基因工程技术生产人胰岛素的操作过程示意图，请据图作答。　

(1)判断某人患糖尿病的主要方法有　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。

(2)能否利用人的皮肤细胞来完成①过程？　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 ，

为什么？　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　。

(3)为使过程⑧更易进行，可用　　　　　　　 处理D的细胞壁。D细胞一般选用大肠杆菌或枯草杆菌的原因是　　　　

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　。

(4)下图A-D段表示质粒的某片段，若B表示启动子，为使目的基因直接表达，目的基因C插入的最佳位点是图中的

　　　　　　 处(填数字序号)。　

(5)根治糖尿病的最佳方法是　　　　　　　　 。　

(6)基因工程其他方面的应用，如被用于培育转胰蛋白酶抑制剂基因的蔬菜，但若对该蔬菜处理不当，可能给人体带来的负面影响是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

答案 (1)空腹时的血糖浓度≥7.0 mmol/L且尿液中有糖　

(2)不能　 皮肤细胞中的胰岛素基因不表达，不能形成胰岛素mRNA　

(3)CaCl₂(或Ca²⁺)　 繁殖速度快，目的基因表达迅速　

(4)③ (5)基因治疗　

(6)胰蛋白酶抑制剂会抑制人的胰蛋白酶的活性，影响食物蛋白的消化　

4.胰岛素可以用于治疗糖尿病，但是胰岛素被注射到人体后，会堆积在皮下，要经过较长的时间才能进入血液，而进入血液的胰岛素又容易分解，因此，治疗效果受到影响。如图是用蛋白质工程设计速效胰岛素的生产过程，请据图回答有关问题：

(1)构建新的蛋白质模型是蛋白质工程的关键，图中构建新的胰岛素模型的主要依据是　　　　　　　　　　　　　　 。

(2)通过DNA合成形成的新基因应与　　　　　 结合后转移到　　　　　　　　　　　　　　　 中才能得到准确表达。

(3)若要利用大肠杆菌生产速效胰岛素，需用到的生物工程有　　　　　　　　　　 、　　　　　　　　　　 和发酵工程。

(4)图解中从新的胰岛素模型到新的胰岛素基因的基本思路是什么？　

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

(5)下列关于蛋白质工程的说法，错误的是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 (　　 )

A.蛋白质工程能定向改造蛋白质分子的结构，使之更加符合人类需要　

B.蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行操作，定向改变分子的结构　

C.蛋白质工程能产生自然界中不曾存在的新型蛋白质分子　

D.蛋白质工程与基因工程密不可分，又称为第二代基因工程

答案 (1)蛋白质的预期功能 (2)载体　 大肠杆菌等受体细胞 (3)蛋白质工程　 基因工程 (4)根据新的胰岛素中氨基酸的序列，推测出其基因中的脱氧核苷酸序列，然后利用DNA合成仪来合成出新的胰岛素基因 (5)B　

3.(2007年海南高考)已知SARS是由一种RNA病毒感染所引起的疾病。SARS病毒表面的S蛋白是主要的病毒抗原，在SARS病人康复后的血清中有抗S蛋白的特异性抗体。某研究小组为了研制预防SARS病毒的疫苗，开展了前期研究工作，其简要的操作流程如下：　

(1)实验步骤①所代表的反应过程是　　　　　　　　　　　 。　

(2)步骤②构建重组表达载体A和重组表达载体B必须使用限制性核酸内切酶和　　　　　　　　 酶，后者的作用是将用限制性核酸内切酶切割的　　　　　　　　 和　　　　　　　　 连接起来。　

(3)如果省略步骤②而将大量扩增的S基因直接导入大肠杆菌，一般情况下，不能得到表达的S蛋白，其原因是S基因在大肠杆菌中不能　　　　　　　　 ，也不能　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

(4)为了检验步骤④所表达的S蛋白是否与病毒S蛋白有相同的免疫反应特性，可用　　　　　　　　　　　　　　　 与　　

　　　　　　　　　　　　 进行抗原--抗体特异性反应实验，从而得出结论。　

(5)步骤④和⑥的结果相比，原核细胞表达的S蛋白与真核细胞表达的S蛋白的氨基酸序列　　　　　　 (相同，不同)，根本原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

答案 (1)逆转录　

(2)DNA连接　 载体　 S基因　

(3)复制　 合成S基因的mRNA　

(4)大肠杆菌中表达的S蛋白　 SARS康复病人血清　

(5)相同　 表达蛋白质所用的基因相同　

2.科学家通过基因工程方法，将苏云金芽孢杆菌的Bt毒蛋白基因转入普通棉株细胞内，并成功实现了表达，从而培育出了能抗棉铃虫的棉花植株--抗虫棉。其过程大致如图所示：　

根据题意回答下列问题：　

(1)基因工程的操作程序主要包括的四个步骤是　　　　　　　　　　　 、　　　　　　　　　　　　 、　　　　　　　

　　　　　　　　　 、　　　　　　　　　　　　　 。　

(2)Ti质粒是农杆菌中的一种质粒，其上有T-DNA，把目的基因插入Ti质粒的T-DNA中是利用T-DNA　　　　　　　 的特点。　

(3)将目的基因导入受体细胞的方法有很多种，该题中涉及的是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

(4)目的基因能否在棉株体内稳定维持和表达其遗传特性的关键是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 ，这需要通过检测才能知道，检测采用的方法是　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　。

答案 (1)目的基因的获取　 基因表达载体的构建　 将目的基因导入受体细胞　 目的基因的检测与鉴定　

(2)可转移至受体细胞并且整合到受体细胞染色体的DNA上　

(3)农杆菌转化法 (4)目的基因是否插入到受体细胞的染色体DNA上　 DNA分子杂交技术　

1.依据基因工程技术有关原理回答下列问题：　

(1)限制性核酸内切酶是在基因工程中用来切开DNA的酶，EcoRI是大肠杆菌的R型菌体分离而来的限制性核酸内切酶，它总是在一定的碱基序列中切断DNA。以下的碱基序列表示的是EcoRI的识别序列，请用箭头在下图中画出EcoRI的作用部位：　

G　 A　 A　 T　 T　 C　

　　 C　 T　 T　 A　 A　 G　

(2)获取目的基因途径有生物体内提取或　　　　　　 。　

(3)下图是将人类的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”的示意图，所用的载体为质粒A。已知细菌B内不含质粒A，也不含质粒A上的基因，质粒A导入细菌B后，其上的基因能得到表达。请回答下列问题：　

①简述重组质粒的主要过程　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。　

②导入细菌B细胞的目的基因成功表达的标志是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

(4)假如预期到某种酶的功能，要设计相应的基因，下列图示中：　

①是　　　　　　　　　　　　 ；②是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

答案 (1)G↓A　 A　 T　 T　 C　

C　 T　 T　 A　 A↑G

(2)人工合成　

(3)①用特定的限制性核酸内切酶切割质粒，使其出现一个有黏性末端的切口；用同种限制性核酸内切酶切割目的基因，产生相同的黏性末端；将切下的目的基因片段插入到质粒的切口处，再加入适量的DNA连接酶，使质粒与目的基因结合成重组质粒　 ②受体细胞通过转录、翻译合成相应的蛋白质，即人的生长激素　

(4)分子设计　 具有一定氨基酸序列的多肽链

6.(2007年山东理综，35)继哺乳动物乳腺生物反应器研发成功后，膀胱生物反应器的研究也取得了一定进展。最近，科学家培育出一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。请回答：　

(1)将人的生长激素基因导入小鼠受体细胞中，常用方法是　　　　　　　　　　 。　

(2)进行基因转移时，通常要将外源基因转入　　　　　　　 中，原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

(3)通常采用　　　　　　　　 技术检测外源基因是否插入了小鼠的基因组。　

(4)在研制膀胱生物反应器时，应使外源基因在小鼠的　　　　　　 　　　细胞中特异表达。　

(5)为使外源基因在后代中长期保持，可将转基因小鼠体细胞的　　　　　　　 转入　　　　　　　 细胞中构成重组细胞，使其发育成与供体具有相同性状的个体，该技术称为　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

答案 (1)显微注射　

(2)受精卵(或早期胚胎)　 受精卵(或早期胚胎细胞)具有全能性，可使外源基因在相应组织细胞中表达　

(3)DNA分子杂交(核酸探针)　

(4)膀胱上皮　

(5)细胞核　 去核的卵　 核移植(或克隆)　

第2、3节　 基因工程的应用和蛋白质工程　

基因工程的应用及对转基因产品的认识　

例1 (2008年金山模拟)如图为基因工程中，利用农杆菌作为载体，培育出新性状植株的过程，请据图分析回答：　

(1)将携带外源基因的DNA导入植物细胞中所用到的工具酶有　　　　　　　　　　　　　　　　 。　

(2)图示中，目的基因导入植物细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，可以通过　　　　　　 　　　来确定。导入目的基因的植物细胞一般需要通过　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 的方法，培育成能表现新性状的植株。

(3)利用基因工程进行育种，可以培育出具有新性状的植株，这种育种方法的优点是什么？　

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。

(4)通过基因工程，科学家已经培育出了许多具有抗虫、抗病、抗除草剂等全新性状的农作物，但也有人对转基因产品的安全性提出了疑问，试从正反两方面阐述你对这一问题的认识。

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。

答案 (1)限制性核酸内切酶和DNA连接酶　

(2)检测转化的植物有没有显示出目的基因控制的性状　 植物组织培养　

(3)①能打破生物种属的界限；②在分子水平上定向改变生物的遗传特性　

(4)安全：①多环节、严谨的安全性评价，可以保证转基因食品的安全；②转基因农作物要表现其新性状，必须有一定条件；③种植抗虫转基因农作物，可减少农药用量　

不安全：①可能会出现新的过敏原；②导入转基因生物的外源基因有可能与感染转基因生物的某些细菌或病毒杂交，从而重组出新的病原体；③重组的微生物降解化合物过程中会产生许多中间产物，造成二次污染　

基因工程、蛋白质工程的应用　

例2　 如图表示从苏云金芽孢杆菌分离出杀虫晶体蛋白基因(简称Bt基因)及形成转基因抗虫植物的图解。　

请回答：　

(1)在下列含有ATP和有关的酶的试管中，大量而快捷的获取Bt基因的最佳方案是下图中的　　　　　　　　 (　　 )

(2)写出b过程表达式：　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　。

(3)科学家计划从哺乳动物的乳汁中提取某种抗体，应将控制抗体合成的基因导入该种动物的　　　　　　　　　　　 中

导入基因成功表达的标志是　　　　　　　　　　　　　　　　 。　

(4)在我国“863”计划资助下开展Bt抗虫棉育种等研究，这将对　　　　　　　　　　　　 、　　　　　　　　　　 和农业可持续发展产生巨大影响。　

答案 (1)D　

(2)Bt基因mRNA原毒素(晶体蛋白)　

(3)受精卵　 动物乳汁中含此种抗体　

(4)农业害虫防治　 环境保护　

　 变式训练　

在对番茄的研究中发现，害虫损伤番茄叶片后，叶上的细胞壁能释放出一种类激素因子，这种物质通过细胞组织扩散到茎和其他叶片上，启动蛋白酶抑制剂的基因后，开始高效合成蛋白酶抑制剂，并在茎叶中迅速积累，以对付害虫的再次侵袭。蛋白酶抑制剂对害虫的消化酶有抑制作用，因此害虫取食后，就会因无法消化食物而被杀死。人们尝试将番茄的蛋白酶抑制剂基因导入玉米，让玉米获得与番茄相似的抗虫性状，以对付异常猖獗的玉米螟(一种玉米害虫)。　

根据材料回答下列问题：　

(1)番茄的蛋白酶抑制剂很可能是在茎叶细胞的　　　　　　　　 处合成的。　

(2)将番茄的蛋白酶抑制基因导入玉米内，使玉米形成新的性状，这种变异属于　　　　　　　　 。　

(3)能抗玉米螟的抗虫玉米的生态效益显著，有人认为抗虫玉米就是无虫玉米，不必防治害虫。你是否赞成这种说法？　　　　　　 。说明理由：　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

(4)有人对食用这种转基因玉米的安全性感到担忧。你认为这种担忧有道理吗？试以学过的知识进行简要的分析说明。　

　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。　

答案 (1)核糖体 (2)基因重组 (3)不赞成　 转基因玉米能抵抗玉米螟，但不能抵抗所有的害虫　

(4)①有道理。这种转基因玉米的果实中可能含有蛋白酶抑制剂，食用后可能抑制人体消化酶的活性，使人无法对食物进行消化而出现病患；②无必要。因为人与害虫消化酶的结构存在差异，玉米果实中含有的蛋白酶抑制剂对害虫的消化酶有抑制作用，但对人可能无影响；③无必要。人类食用的通常是煮熟后的玉米食品，玉米果实中含有的蛋白酶抑制剂在高温下已经被破坏，因此不会对人的消化造成不良影响(答案不惟一)

5.我国科研人员发现，弯曲的蚕丝由于弯折处易断裂，其强度低于由蜘蛛纺绩器拖牵丝的直丝，并首次在世界上通过了转基因方法将“绿色荧光蛋白基因”与“蜘蛛拖牵丝基因”拼接后成功插入蚕丝基因组中，并在受体细胞中成功表达。　

(1)在这项“基因工程”的操作中，目的基因是　　　　　　　 ，采用绿色荧光蛋白基因的主要目的是　　　　　　　 。

(2)两基因组合在导入受体细胞前必须进行的步骤是：将其与由细菌体内取得的　　　　　 进行切割处理，以保证有相同的　　　　　　　　 ，并拼接成　　　　　　　 。如果引入的受体细胞是细菌，还要对细菌作　　　　　　　　 处理。

(3)在基因工程中受体常用微生物，为什么？　

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

(4)“蜘蛛拖牵丝基因”成功表达的标志是　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。

(5)带有“绿色荧光蛋白基因”的转基因蚕，是否能引起生态安全性问题？请分析原因。　

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。

　答案 (1)拖牵丝基因　 作为标记(基因) (2)质粒　 黏性末端　 重组质粒(或重组DNA)　 CaCl₂(或提高膜的通透性)(3)微生物的繁殖速度快 (4)产生高强度的丝　

(5)可能。转基因蚕扩散进入自然生态系统，与同种的野生蚕杂交后，使野生蚕也含有转基因，可能会威胁到原有物种，引起生态危机　

4.(2008年姜堰模拟)萤火虫发光是体内荧光素酶催化一系列反应所产生的现象。如果荧光素酶存在于植物体内，也可使植物体发光。一直以来荧光素酶的惟一来源是从萤光虫腹部提取。但加利福尼亚大学的一组科学家成功地通过转基因工程实现了将荧光素酶基因导入到大肠杆菌体内，并在大肠杆菌体内产生荧光素酶。请你根据已有的知识回答下列有关问题：

(1)在此转基因工程中，目的基因是　　　　　　　　 ，具体操作过程中下图所示的黏性末端是由　　　　 种限制性核酸内切酶作用产生的。　

(2)在上述过程中需要多种酶的参与，其中包括限制性核酸内切酶、DNA聚合酶和　　　　　　　　　 等。　

(3)将此目的基因导入到大肠杆菌体内需要载体的帮助。下列各项是选取载体时必须考虑的是　　　　　　　 (多选)。

A.能够在宿主细胞内复制并稳定保存　　　　　　　　　　 B.具有特定的限制酶切割位点　

C.具有与目的基因相同的碱基片段　　　　　　　　　　　 D.具有某些标记基因　

(4)本实验中将目的基因导入大肠杆菌的载体可以是　　　　　 (多选)。　

A.质粒　　　　　　　　　　　　 B.动物病毒　　　　　　 C.噬菌体　　　　　　　　 D.植物病毒　

(5)在此转基因工程中，将体外重组DNA导入大肠杆菌体内，并使其在细胞内维持稳定和表达的过程称为　　　　　　 。最常用的方法是首先用　　　　　　 处理大肠杆菌，目的是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

(6)目的基因是否导入受体细胞，用　　　　　　　　　　　　 技术来检测。目的基因是否表达出相应的蛋白质，除了通过大肠杆菌是否发光来确定外，还可以通过　　　　　　　 特异性反应来判断。　

答案 (1)荧光素酶基因　 2　

(2)DNA连接酶 (3)A、B、D (4)A、C　

(5)转化　 Ca²⁺　 使大肠杆菌细胞处于能够吸收周围DNA分子的状态(处于感受态细胞状态)　

(6)DNA分子杂交　 抗原-抗体　

3.如图为利用生物技术获得生物新品种的过程，据图回答：　

(1)在基因工程中，A→B为　　　　　　　　　　 技术，利用的原理是　　　　　　 ，其中①为　　　　　　　 过程。

(2)加热至94℃的目的是使DNA中的　　　　　　　 键断裂，这一过程在细胞内是通过　　　　　　　 的作用来完成的。

(3)当温度降低时，引物与模板末端结合，在DNA聚合酶的作用下，引物沿模板链延伸，最终合成两条DNA分子，此过程中的原料是　　　　　　　 ，遵循的原则是　　　　　　　　　　　　　 　。　

(4)目的基因导入绵羊受体细胞常用　　　　　　　 技术。　

(5)B→D为抗虫棉的培育过程，其中④过程常用的方法是　　　　　　　　　 ，要确定目的基因(抗虫基因)导入受体细胞后，是否能稳定遗传并表达，需进行检测和鉴定工作，请写出在个体生物学水平上的鉴定过程：　　　　　　　　　　　

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　。

答案 (1)PCR　 DNA复制　 DNA解旋　

(2)氢　 解旋酶　

(3)4种脱氧核苷酸　 碱基互补配对原则　

(4)显微注射　

(5)农杆菌转化法　 让害虫吞食转基因棉花的叶子，观察害虫的存活情况，以确定性状