Question

人外周血单核细胞能合成白介素2（IL-2），是含有113个氨基酸残基的糖蛋白，该蛋白可增强机体免疫功能，但在体内易被降解．研究人员将IL-2基因与人血清白蛋白（HSA）基因拼接成一个融合基因，并在受体细胞中表达，获得具有IL-2生理功能、且不易降解的IL-2-HSA融合蛋白．其技术流程如图．请回答：
（1）培养人外周血单核细胞时，需要通入

 

（气体）；图中②表示

 

过程．
（2）位点a应能被

 

限制酶切割．为了使融合基因能够完整表达出所需产物，应将表达载体2导入的受体细胞是

 

（填大肠杆菌或酵母菌）．
（3）检测工程菌是否合成了IL-2-HSA融合蛋白，应采用

 

方法．

Answer 1

考点：基因工程的原理及技术

专题：

分析：分析题图：①表示从人的外周学细胞去mRNA；②表示以mRNA为模板逆转录形成cDNA的过程；③表示基因表达载体的构建过程，需要限制酶和DNA连接酶．目的基因IL-2cDNA的两端的酶切位点分别是EcoRⅠ和BglⅡ，所以表达载体1也必须有这两个酶切位点，而表达载体1上已有EcoRⅠ，因此位点a应含有BglⅡ．

解答： 解：（1）动物细胞培养所需要的条件是：95%空气和5%CO₂气体环境、适宜温度（37℃）和PH、无毒无菌的环境及合适的营养成分，其培养基中通常需加入血清、血浆等一些天然成分；图中②mRNA→cDNA，表示逆转录过程．
（2）目的基因IL-2cDNA和表达载体1在构建表达载体2时需先用限制酶切割让二者获得相同的黏性末端，然后在DNA连接酶的作用下重新组合．根据目的基因IL-2cDNA的两端的酶切位点分别是EcoRⅠ和BglⅡ，所以表达载体1也必须有这两个酶切位点，而表达载体1上已有EcoRⅠ，因此位点a应被BglⅡ限制酶切割．
（3）应用抗原-抗体杂交技术可检测酵母菌是否表达出IL-2-HSA融合蛋白．
故答案为：
（1）O₂和CO₂   逆转录   
（2）BglⅡ酵母菌
（3）抗原-抗体杂交

点评：本题结合流程图，考查基因工程的相关知识，要求考生能够识记动物细胞培养的条件；掌握限制酶的作用特点；识记目的基因分子水平检测的方法等．