步   骤
注 意 问 题
分   析
1.提取色素
5克绿叶剪碎,放入研钵,加SiO2、CaCO3和5mL丙酮(或10mL无水乙醇)迅速、充分研磨。(若没有无水乙醇,也可用体积分数为95%的乙醇,但要加入适量的无水碳酸钠,除去水分)
加SiO2
加CaCO3
 
 
加丙酮
迅速
加SiO2为了研磨得更充分。
加CaCO3防止研磨时叶绿素受到破坏。因为叶绿素含镁,可被细胞液中的有机酸产生的氢代替,形成去镁叶绿素,CaCO3可中和液泡破坏释放的有机酸,防止叶绿体被破坏。
叶绿体色素易溶于丙酮等有机溶剂。
减少研磨过程叶绿素的分解,减少有毒性的丙酮挥发。
2.收集滤液
漏斗基部放一单层尼龙布,研磨倒入漏斗内挤压,将滤液收集到小试管中,用棉花塞塞住试管口。
 
 
尼龙布起过滤作用。
 
试管口用棉花塞塞紧是为了防止丙酮挥发。
3.制备滤纸条
将干燥的滤纸,顺着纸纹剪成长10cm,宽1cm的纸条,一端剪去二个角,并在距这一端1cm处划一铅笔线。
 
干燥
顺着纸纹剪成长条
一端剪去二个角
 
可吸收更多的滤液。
层析时,色素分离效果好。
可使层析液同时到达滤液细线。
4.划滤液细线
用毛细吸管吸取少量滤液,沿铅笔线划出细、齐、直的一条滤液细线,干后重复三次。
 
滤液细线越细、越齐越好。
重复三次。
 
防止色素带之间部分重叠。
 
增加色素在滤纸上的附着量,实验结果更明显。
5.纸层析法分离色素
将3mL层析液倒入烧杯中,将滤纸条(划线一端朝下)插入层析液中,用培养皿盖盖上烧杯。
 
层析液不能没及滤纸条。
烧杯要盖培养皿盖。
 
防止色素溶解在层析液中,
 
层析液中的苯、丙酮、石油醚易挥发。
6.观察实验结果
 
 

扩散最快是胡萝卜素,扩散最慢是叶绿素b,含量最多的是叶绿素a。
 
四种色素之所以能被分离,是因为四种色素随层析液在滤纸上的扩散速度不同。

五:实验讨论:

1.滤纸条上的滤液细线,为什么不能触及层析液?

答:滤纸条上的滤液细线如触及层析液,滤纸上的叶绿体色素就会溶解在层析液中,实验就会失败。

三)方法步骤:

操作
注意问题
解释
取3支试管,编上号,然后分别注入2mL可溶性淀粉溶液
 
 
另取3支试管,编上号,然后分别注入1mL新鲜淀粉酶溶液
 
 
将装有淀粉溶液和酶溶液的试管分成3组,分别放入热水(约600C)、沸水和冰块中,维持各自的温度5min
不能只用不同温度处理淀粉溶液或酶溶液
防止混合时,由于两种溶液的温度不同而使混合后温度发生变化,反应温度不是操作者所要控制的温度,影响实验结果。
分别将淀粉酶溶液注入相同温度下的淀粉溶液中,摇匀后,维持各自的温度5min
保持各自温度时间不能太短
淀粉酶催化淀粉水解需要一定时间
在3支试管中各滴入1-2滴碘液,摇匀后观察这3支试管中溶液颜色变化并记录
碘液不能滴加太多
防止影响实验现象的观察

用表格的形式显示实验步骤

序号
加入试剂或处理方法
试管
A
B
C
a
b
c
1
可溶性淀粉溶液
2mL
2mL
2mL
/
/
/
新鲜淀粉酶溶液
/
/
/
1mL
1mL
1mL
2
保温5min
600C
1000C
00C
600C
1000C
00C
3
将a液加入到A试管,b液加入到B试管,c液加入到C试管中,摇匀
 
4
保温5min
600C
1000C
00C
 
5
滴入碘液,摇匀
2滴
2滴
2滴
 
6
观察现象并记录
 
 
 
 

实例3:PH值对酶活性的影响

操作步骤:用表格开式显示实验步骤:(注意操作顺序不能错)

序号
加入试剂或处理方法
试管
1
2
3
1
注入新鲜的淀粉酶溶液
1mL
1mL
1mL
2
注入蒸馏水
1mL
/
/
3
注入氢氧化钠溶液
/
1mL
/
4
注入盐酸
/
/
1mL
5
注入可溶性淀粉溶液
2mL
2mL
2mL
6
600C水浴保温5min
 
7
加入斐林试剂,边加边振荡
2mL
2mL
2mL
8
水浴加热煮沸1min
 
9
观察3支试管中溶液颜色变化变记录
 
 
 

实验七   叶绿体色素的提取和分离

 0  208146  208154  208160  208164  208170  208172  208176  208182  208184  208190  208196  208200  208202  208206  208212  208214  208220  208224  208226  208230  208232  208236  208238  208240  208241  208242  208244  208245  208246  208248  208250  208254  208256  208260  208262  208266  208272  208274  208280  208284  208286  208290  208296  208302  208304  208310  208314  208316  208322  208326  208332  208340  447348 

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