6.草鱼出血病病毒(GCRV)是RNA病毒,易引起草鱼出血病,给水产养殖业造成巨大损失.科学家尝试用GCRV的外壳VP6蛋白基因,利用基因工程的方法制备蛋白疫苗,并通过草鱼攻毒实验检测免疫保护效果.
(1)下列能够作为抗原引发鱼体产生特异性免疫的是(多选)CD
A.VP6蛋白基因     B.重组质粒   C.GCRV外壳蛋白    D.出血病病毒
(2)GCRV的遗传物质是RNA,因此需要在逆转录酶的作用下先合成  cDNA,再设计相应的引物,通过PCR技术获得大量的VP6基因.用限制酶和DNA连接酶处理VP6基因和质粒,构建表达载体后导入大肠杆菌,筛选出能成功表达VP6蛋白的大肠杆菌,提取重组VP6蛋白作为蛋白疫苗.
(3)鱼体免疫实验:实验前2周,选取健壮无病的同一批次、大小相似的草鱼鱼种置于适宜水温中饲育.配制一定浓度的重组VP6蛋白,按400μL/尾从背鳍基部肌肉注射入鱼体内,同时设未免疫的草鱼为对照组,每组40尾.草鱼注射蛋白疫苗后,按不同免疫时间检测其体内抗体水平,结果如图.将重组VP6蛋白注射入草鱼体内,经免疫过程使鱼体内产生抗体和记忆B细胞,从而起到免疫保护作用.由实验结果分析,在不同检测时间点,草鱼血液中的抗体水平均高于对照组,说明纯化的重组VP6蛋白具有良好的免疫原性;在第21天草鱼体内抗体达到高峰,随后呈下降趋势,该结果与体内抗体的消长规律相符.为了进一步检测免疫效果,草鱼注射重组VP6蛋白一段时间后,人工接种GCRV进行攻毒实验,结果显示,攻毒4-7天后,对照组100%发病死亡,而免疫组未见感染发病.对照组发病死亡的鱼需经解剖分析,以确定死因是GCRV引起的(或排出其他病原体导致的死亡).上述实验结果表明用纯化的重组VP6蛋白免疫草鱼对出血病具有较好的免疫保护作用.
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