Question

6．草鱼出血病病毒（GCRV）是RNA病毒，易引起草鱼出血病，给水产养殖业造成巨大损失．科学家尝试用GCRV的外壳VP6蛋白基因，利用基因工程的方法制备蛋白疫苗，并通过草鱼攻毒实验检测免疫保护效果．
（1）下列能够作为抗原引发鱼体产生特异性免疫的是（多选）CD
A．VP6蛋白基因     B．重组质粒   C．GCRV外壳蛋白    D．出血病病毒
（2）GCRV的遗传物质是RNA，因此需要在逆转录酶的作用下先合成  cDNA，再设计相应的引物，通过PCR技术获得大量的VP6基因．用限制酶和DNA连接酶处理VP6基因和质粒，构建表达载体后导入大肠杆菌，筛选出能成功表达VP6蛋白的大肠杆菌，提取重组VP6蛋白作为蛋白疫苗．
（3）鱼体免疫实验：实验前2周，选取健壮无病的同一批次、大小相似的草鱼鱼种置于适宜水温中饲育．配制一定浓度的重组VP6蛋白，按400μL/尾从背鳍基部肌肉注射入鱼体内，同时设未免疫的草鱼为对照组，每组40尾．草鱼注射蛋白疫苗后，按不同免疫时间检测其体内抗体水平，结果如图．将重组VP6蛋白注射入草鱼体内，经免疫过程使鱼体内产生抗体和记忆B细胞，从而起到免疫保护作用．由实验结果分析，在不同检测时间点，草鱼血液中的抗体水平均高于对照组，说明纯化的重组VP6蛋白具有良好的免疫原性；在第21天草鱼体内抗体达到高峰，随后呈下降趋势，该结果与体内抗体的消长规律相符．为了进一步检测免疫效果，草鱼注射重组VP6蛋白一段时间后，人工接种GCRV进行攻毒实验，结果显示，攻毒4-7天后，对照组100%发病死亡，而免疫组未见感染发病．对照组发病死亡的鱼需经解剖分析，以确定死因是GCRV引起的（或排出其他病原体导致的死亡）．上述实验结果表明用纯化的重组VP6蛋白免疫草鱼对出血病具有较好的免疫保护作用．

Answer 1

分析 分析柱形图：该图是注射VP6蛋白作为蛋白疫苗，检测抗体含量的实验，有实验结果可以看出：，在不同检测时间点，草鱼血液中的抗体水平均高于对照组，说明纯化的重组VP6蛋白具有良好的免疫原性；在第21草鱼体内抗体达到高峰，随后呈下降趋势．

解答 解：（1）草鱼病毒性出血病是由草鱼呼肠弧病毒（GCRV）引起的，而GCRV的外壳蛋白是引起草鱼患病毒性出血病的抗原物质．故注射GCRV外壳蛋白或者出血病病毒都能作为抗原引发鱼体产生特异性免疫．
（2）GCRV的遗传物质是RNA，因此需要在逆转录酶的作用下先合成cDNA，再设计相应的引物，通过PCR技术获得大量的VP6基因．用限制酶和DNA连接酶处理VP6基因和质粒，构建表达载体后导入大肠杆菌，筛选出能成功表达VP6蛋白的大肠杆菌，提取重组VP6蛋白作为蛋白疫苗．
（3）要通过草鱼检测疫苗的效果，故实验的自变量是有无注射疫苗-VP6蛋白，故选取健壮无病的同一批次、大小相似的草鱼鱼种置于适宜水温中饲育．配制一定浓度的重组VP6蛋白，按400μL/尾从背鳍基部肌肉注射入鱼体内，同时设未免疫的草鱼为对照组，将重组VP6蛋白注射入草鱼体内，经免疫过程使鱼体内产生抗体和记忆B细胞，由实验结果分析，在不同检测时间点，草鱼血液中的抗体水平均高于对照组，说明纯化的重组VP6蛋白具有良好的免疫原性；在第21草鱼体内抗体达到高峰，随后呈下降趋势，为了进一步检测免疫效果，草鱼注射重组VP6蛋白一段时间后，人工接种GCRV进行攻毒实验，攻毒4-7天后，对照组100%发病死亡，而免疫组未见感染发病．对照组发病死亡的鱼需经解剖分析，以确定死因是GCRV引起的（或排出其他病原体导致的死亡）．
故答案为：
（1）C D 
（2）逆转录    PCR   限制酶和DNA连接 
（3）未免疫的草鱼   记忆B细胞    高于 21   GCRV 死因是GCRV引起的（或排出其他病原体导致的死亡）

点评 本题考查了免疫相关的知识，意在考查考生分析实验目的，分析实验结果，获取实验结论的能力，难度适中，对于免疫过程及免疫预防的理解是解题的关键．