20.扩增多个目的基因用PCK技术.如图1为某种常用质粒的序列图,Lac Z基因编码的酶能使无色的X-gal变为蓝色,Ampr为氨苄青霉素抗性基因.图2为目的基因的序列及其相关限制酶的识别序列.请回答下列问题:

(1)若要筛选成功导入目的基因的重组质粒,培养基中应加入的物质有X-gal、氨苄青霉素.
(2)用图中的限制酶切割目的基因和质粒,不能(填“能”或“不能”)实现目的基因与质粒的定向连接?原因是BamHI和BgⅡ两种限制酶切得黏性末端相同.
(3)将若干个质粒和目的基因用BamHI和BgⅡ两种限制酶切割后,用DNA连接酶相连,然后再用BamH I和EcoR I切割成功连接后的产物,获得了长度为0.7kb、2.8kb、1kb和2.5kb四种长度的DNA片段,则目的基因的长度为1.8kb(已知目的基因的长度大于1kb,lkb=1000个碱基对).
(4)PCK技术中所用的引物是根据目的基因 的一段核苷酸序列合成的.如表是用于扩增A、B、C三种基因的引物:
A基因引物15′GCTCCTACAAATGCCATCATTGC3′
引物25′GATAGTGGGATTGTGCGTCATCCC3′
B基因引物15′TGAATCCTGTTGCCGGTCTT3′
引物25′AAATGTATAATTGCGGGACTCTAATC3′
C基因引物15′CCTTCATGTTCGGCGGTCTCG3′
引物25′GCGTCATGATCGGCTCGATG3′
据表分析,引物特异性主要表现在核苷酸的数目不同、序列不同;每个基因对应的引物1和引物2之间不能互补配对.
(5)PCR过程中温度从90℃降到55-60℃的目的是使引物与模板链相应序列互补结合.
 0  128358  128366  128372  128376  128382  128384  128388  128394  128396  128402  128408  128412  128414  128418  128424  128426  128432  128436  128438  128442  128444  128448  128450  128452  128453  128454  128456  128457  128458  128460  128462  128466  128468  128472  128474  128478  128484  128486  128492  128496  128498  128502  128508  128514  128516  128522  128526  128528  128534  128538  128544  128552  170175 

违法和不良信息举报电话:027-86699610 举报邮箱:58377363@163.com

精英家教网