下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点,图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点,图1中Cmlr表示氯霉素抗性基因,Ner表示新霉素抗性基因.请回答下列问题:
限制酶MspⅠBamHⅠSmaⅠHpaⅡKpmⅠ
识别序列及切割位点CCGG
GGCC
 GGATCC
CCTAGG
 CCCGGG
GGGCCC
CCGG
GGCC
GGTACC
CCATGG

(1)将提取的质粒与外源DNA分别加入缓冲液中,选用相应的限制酶处理时,影响处理效果的外界因素主要是等
 
(写出两点).
(2)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒时,能否使用MspⅠ与BamHⅠ同时切割质粒与外源DNA?答:
 
,原因是
 

(3)可选用
 
 
限制酶同时酶切质粒与外源DNA,酶切并连接后可获得
 
种含目的基因的重组质粒,筛选含有该重组质粒的大肠杆菌时,需要在含
 
的培养基上培养.
(4)研究发现当CCGG序列在X酶作用下,其内部胞嘧啶残基发生变化后,MspⅠ仍能识别并切割,但HpaⅡ则不能识别,而BamHI和SmaI对类似变化也十分敏感,KpnⅠ则不敏感.若在含有图1所示质粒和X酶的缓冲液中,同时加入KpnⅠ、HpaⅡ、MspⅠ和SmaⅠ并完全酶切后,则最可能得到
 
种DNA序列.
(5)为了从基因文库中分离获取T1噬菌体抗性基因,将重组质粒导入对T1噬菌体敏感的大肠杆菌,然后将含有该大肠杆菌的菌液分别接种在预先涂有
 
的培养基上培养,从而初步检测目的基因的表达.
 0  103856  103864  103870  103874  103880  103882  103886  103892  103894  103900  103906  103910  103912  103916  103922  103924  103930  103934  103936  103940  103942  103946  103948  103950  103951  103952  103954  103955  103956  103958  103960  103964  103966  103970  103972  103976  103982  103984  103990  103994  103996  104000  104006  104012  104014  104020  104024  104026  104032  104036  104042  104050  170175 

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