Question

9．生物兴趣小组试图为探究牛和山羊的瘤胃中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能降解尿素的细菌（目的菌）．培养基成分如表所示，实验步骤如图所示．请分析回答问题：

KH2PO4	1.4g
Na2HPO4	2.1g
MgSO4•7H2O	0.2g
葡萄糖	10g
尿素	1g
琼脂	15g
溶解后自来水定容到1000mL

（1）在实验过程中：①培养基  ②培养皿  ③玻棒、试管、锥形瓶、吸管  ④瘤胃中液体．其中需要灭菌是①②③（填序号）．
（2）分离分解尿素的细菌实验时，甲同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落．甲同学实验结果差异的原因可能有①②③（填序号）①取样不同 ②培养基污染 ③操作失误 ④没有设置对照
（3）以尿素为唯一氮源的培养基培养“目的菌”后，加入酚红指示剂后变红色，说明“目的菌”能分解尿素．
（4）比较细菌与酵母菌的结构最明显的区别是；细菌没有以核膜为界的成形的细胞核．从同化作用类型来看的，筛选出来的“目的菌”属于异养型生物．
（5）为进一步确定取自瘤胃中液体的适当稀释倍数，用稀释涂布平板法接种，然后将接种的培养皿放置在37℃恒温培养箱中培养24h～48h，观察并统计具有红色环带的菌落数，结果如表，其中10⁶或10⁵倍的稀释比较合适．

稀释倍数	103	104	105	106	107
菌落数	＞500	367	248	36	18

Answer 1

分析 1、微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．
2、选择培养基是在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质，抑制不需要的微生物的生长，有利于所需微生物的生长．
3、消毒和灭菌

	消毒	灭菌
概念	使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包芽孢和孢子）	使用强烈的理化因素杀死物体内外所用的微生物（包括芽孢和孢子）
常用方法	煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法	灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌
适用对象	操作空间、某些液体、双手等	接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等

解答 解：（1）在实验过程中：①培养基  ②培养皿  ③玻棒、试管、锥形瓶、吸管  ④瘤胃中液体．其中需要灭菌是①培养基  ②培养皿  ③玻棒、试管、锥形瓶、吸管．
（2）由题意知，该同学与其他同学获得的菌落数差异很大，可能的原因是采用的土样不同，培养基灭菌不彻底，培养基被污染；或者是实验过程中没有进行无菌操作．
（3）以尿素为唯一氮源的培养基培养“目的菌”后，加入酚红指示剂后变红色，说明“目的菌”能分解尿素．
（4）细菌属于原核生物，酵母菌属于真核生物，因此比较细菌与酵母菌的结构最明显的区别是：细菌没有以核膜为界的成形的细胞核．从同化作用类型来看的，该菌属于异养型，需加入葡萄糖等有机碳源．
（5）观察并统计菌落数应选30-300之间的培养皿进行统计，故应选10⁶或10⁵倍的稀释比较合适．
故答案为：
（1）①②③
（2）①②③
（3）尿素“目的菌”能分解尿素
（4）没有以核膜为界的成形的细胞核   异养型生物
（5）稀释涂布平板    10⁶或10⁵

点评 本题是对用于微生物培养的培养基的配方及营养成分、选择培养基的选择作用、常用的接种方法、无菌操作技术、对分解尿素的菌的鉴定等相关知识的综合性考查，回忆微生物培养的培养基的配方和营养成分、选择培养基的选择作、常用的接种方法的具体操作和目的，无菌操作技术、对分解尿素的菌的鉴然后结合问题进行解答．