Question

13．硅酸盐细菌可以将土壤中不溶性的含钾矿物（如长石、云母）以及磷灰石等分解转化，释放出水溶性的钾、磷，将土壤中的无效磷钾转化为速效养分．现代工业可将硅酸盐细菌制成肥料，达到增产目的．硅酸盐细菌在无氮培养基、钾细菌培养基以及硅酸盐细菌培养基上均能生长．请回答下列问题：
（1）在微生物培养过程中，为了防止杂菌污染，需要对培养基和培养皿进行灭菌；在倒平板时，应在酒精灯火焰附近进行操作．
（2）为了将分离到的菌株纯化，挑取了菌落在3块相同平板上划线，结果其中一块平板的各划线区均未见菌生长，最可能的原因是接种环温度过高，细菌均被杀死．
（3）采用稀释涂布平板法统计硅酸盐细菌活菌的个数，要使得到的估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样本稀释的比例合适．如表是每种培养基上每个稀释度的平均菌落数及菌落直径的情况．

培养基种类	各稀释度对应的平均菌落数				菌落直径（mm）
	103	104	105	106
无氮培养基	32	3	2	0	1.0～2.0
钾细菌培养基	36	6	4	0.6	多数小于1.5
硅酸盐细菌培养基	50	8	5	1.2	多数大于2.0

根据表格分析可知，该实验的自变量是培养基的种类及细菌的稀释度．根据实验结果分析，采用硅酸盐细菌培养基筛选硅酸盐细菌的效果最好．对分离的硅酸盐细菌进行计数时，统计的菌落数目往往比活菌的实际数目少．
（4）若在进行上述实验的同时不设置空白对照，则不能确定培养基灭菌是否彻底．

Answer 1

分析 微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．

解答 解：（1）在微生物培养过程中，为防止杂菌污染，需要对培养基和培养皿进行灭菌．在倒平板时，应在酒精灯火焰附近进行操作．
（2）由于该接种过程中的3块平板相同，菌种来源相同，只有一块平板接种培养后无菌落生长，对比可知，问题应出现在接种过程中，最可能的原因是接种环温度过高，细菌均被杀死．
（3）采用稀释涂布平板法统计硅酸盐细菌活菌的个数，要使得到的估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样本稀释的比例合适．根据表格中的数据可知，自变量为培养基种类及细菌的稀释度，因变量为平均菌落数及菌落直径．根据实验结果可知，在硅酸盐细菌培养基上培养时，平均菌落数最多，菌落直径最大，说明采用硅酸盐细菌培养基筛选硅酸盐细菌的效果最好．由于两个或者多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，所以统计的菌落数目往往比活菌的实际数目少．
（4）若不设置空白对照，则不能确定培养基灭菌是否彻底．
故答案为：
（1）防止杂菌污染酒精灯火焰
（2）接种环温度过高，细菌均被杀死
（3）比例合适    培养基的种类及细菌的稀释度    硅酸盐细菌     少
（4）培养基灭菌是否彻底

点评 本题主要考查培养基的制作和微生物的接种方法，意在强化学生对实验室的微生物的培养的相关知识的理解与掌握．