题目内容

10．人们常采用生物工程技术以获得需要的生物新品种或新产品．回答下列问题：
（1）培育转基因生物时常需要构建基因表达载体，该过程中需耍的工具酶有限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶，在构建的基因表达载体中，目的基因的首端必须含有启动子，将基因表达载体导入到受体细胞中常用的方法是显微注射法．
（2）若要培育出多头相同的转基因动物，需要对培养到桑椹胚或囊胚阶段的胚胎进行分割后转入到经同期发情（促性腺激素）处理的受体动物体内．
（3）在抗虫棉培育过程中，采用愈伤组织细胞作为受体细胞，与采用叶肉细胞相比较，其优点是全能性高，将抗虫基因转入受体细胞后，还需要采用植物组织培养技术才能获得抗虫棉植株．

分析 基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）构建基因表达载体时，首先需要用限制酶切割含有目的基因的外源DNA和运载体，其次需要DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组DNA．在构建的基因表达载体中，目的基因的首端必须含有启动子，启动子是RNA聚合酶结合的位点，能启动转录过程；将基因表达载体导入动物细胞常用显微注射法．
（2）胚胎分割时应该选择形态正常、发育良好的桑椹胚或囊胚．胚胎移植前，需对受体进行同期发情处理，保证胚胎移植入相同的生理环境．
（3）愈伤组织细胞是外植体经过脱分化过程形成的，以其作为受体细胞，与采用叶肉细胞相比较，其优点是全能性高；将转基因植物细胞培育成转基因植株需要采用植物组织培养技术．
故答案为：
（1）限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶     启动子    显微注射法
（2）桑椹胚或囊胚       同期发情（促性腺激素）
（3）全能性高       植物组织培养

点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能结合所学的知识准确答题，属于考纲识记和理解层次的考查．

练习册系列答案
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（1）在构建目的基因表达载体时，需用同种限制性核酸内切酶对含编码抗草甘膦酶基因的DNA和运载体进行酶切．
（2）基因表达载体除了带有抗草甘膦酶的基因以外，还必须含有启动子、终止子和标记基因等．
（3）请写出两种检测目的基因是否表达的方法：抗原-抗体杂交法和喷施草甘膦溶液．
（4）在检测进口大豆是否为转基因产品时，可用核酸探针进行检测．核酸探针可以用PCR技术进行基因克隆，此克隆过程是利用DNA复制的原理，利用该技术的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，需加入的酶是耐高温的DNA聚合（Taq）酶．
2．2013年诺贝尔生理医学奖授予了发现囊泡运输调控机制的三位科学家．如图所示是囊泡膜与靶膜融合过程示意图，请回答：

（1）囊泡是由单层膜所包裹的膜性结构，其基本支架为磷脂双分子层．囊泡膜与细胞膜、细胞器膜和核膜等共同构成生物膜系统．
（2）由图可知，囊泡上有一个特殊的V-SNARE蛋白，它与靶膜上的T-SNARE结合形成稳定的结构后，囊泡和靶膜才能融合，从而将物质准确地运送到相应的位点，该融合过程体现了膜具有流动性性．
（3）浆细胞在分泌抗体的过程中，参与囊泡形成和运输的细胞结构依次是内质网、高尔基体、细胞膜．
（4）在神经细胞内，当电信号传至轴突末梢时，囊泡与突触前膜融合，释放神经递质，神经递质进入突触间隙需穿过0层磷脂分子．
19．下列相关实验中涉及“分离”的叙述正确的是（　　）
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20．黄曲霉毒素B1 （AFB1）存在于被黄曲霉菌污染的饲料中，它可以通过食物链进入动物体内并蓄积，引起瘤变．某些微生物能合成AFB1解毒酶．将该酶添加在饲料中可以降解AFB1，清除其毒性．下图为采用基因工程技术生产AFB1解毒酶的流程图

请回答：
（1）基因工程常见的运载工具（体）有质粒、λ噬菌体衍生物、动植物病毒．将目的基因导入酵母细胞，最常用的化学方法是CaCl2处理．
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