3.检测生物组织中糖类、脂肪、蛋白质的其他简易方法
(1)检测生物组织中糖类的其他简易方法
Molisch反应(α- 萘酚反应) 此方法是鉴定糖类最常用的颜色反应。它的原理是:糖类在浓酸作用下所形成的糠醛及其衍生物可以与α- 萘酚作用,形成红紫色复合物。由于在糖溶液与浓硫酸两液面间出现红紫色的环,因此又称紫环反应。α- 萘酚也可用麝香草酚或其他的苯酚化合物代替,麝香草酚溶液比较稳定,其灵敏度与α- 萘酚一样。除了糖类之外,各种糠醛衍生物、葡萄糖醛酸、丙酮、甲酸、乳酸等都可以呈现近似的阳性反应。因此,阴性反应证明没有糖类物质的存在;而阳性反应只能说明有糖类存在的可能。
蒽酮反应 糖类经浓酸水解,脱水生成的糠醛及其衍生物与蒽酮(10-酮-9,10-二氢蒽)反应生成蓝绿色复合物。
Benedict反应 班氏试剂是斐林试剂的改良(也是含有Cu2+的碱性溶液),能使具有自由醛基或酮基的糖类氧化,其本身则变成砖红色或黄色的Cu2O,可用来测定还原糖的存在。它利用柠檬酸作为Cu2+的络合剂,其碱性比斐林试剂弱,灵敏度高,干扰因素少,因而在实际应用中有更多的优点。
Bial反应(甲基间苯二酚反应) 戊糖与浓盐酸加热形成糠醛,在有Fe3+存在的条件下,它与甲基间苯二酚(地衣酚)缩合,形成深蓝色的沉淀物(此沉淀物溶于正丁醇)。己糖也能发生反应,产生灰绿色甚至棕色的沉淀物。
(2)检测生物组织中脂肪的其他简易方法
油点试验(spot test) 将含有脂肪的混合物磨碎后擦在一片滤纸(或牛皮纸)上,然后朝向光源观看,应该有半透明的油点出现。此油点不能挥发掉。当滤纸浸过苯(或醚、异丙醇等)后,油点消失;或将混合物磨碎后溶于苯液中,然后过滤。取一滤纸放入滤液中,取出后让苯挥发,朝向光源观看,如有半透明油点存在,则证明混合物中含有脂肪。
乳液形成试验(emulsion test) 将一含有脂肪的混合物溶液稍微加热,加入少量乙醇,摇匀后静置。脂肪可分散成许多微粒,形成白色乳状液。
(3)检测生物组织中蛋白质的其他简易方法
对各种氨基酸特异的某些颜色反应(见表8),可用来检测含有这些氨基酸的蛋白质。这些颜色反应包括Millon反应、黄蛋白反应、茚三酮反应以及Hopkins-Cole(水合乙醛酸)反应等。
Millon反应 米伦试剂为硝酸、亚硝酸、硝酸汞、亚硝酸汞的混合物,能与单酚及双酚和吲哚衍生物产生颜色反应,但不能检验尿蛋白。
茚三酮反应 蛋白质、多肽和各种氨基酸具有茚三酮反应。除无α?氨基的脯氨酸和羟脯氨酸呈黄色外,其他氨基酸生成紫红色,最终为蓝色化合物。
黄蛋白反应 它是芳香族氨基酸,特别是酪氨酸和色氨酸蛋白质所特有的颜色反应。
表8 部分氨基酸的颜色反应
|
所测定的氨基酸 |
名称 |
试剂 |
颜色 |
|
精氨酸
半胱氨酸
半胱氨酸
组氨酸,酪氨酸
色氨酸
色氨酸
酪氨酸
酪氨酸
酪氨酸,色氨酸
苯丙酪氨酸 |
Sakaguchi(坂口)反应
硝普盐反应
Sullivan反应
Pauly反应
水合乙醛酸反应
(Hopkins-Cole反应)
Ehrlich反应
Millon反应
Folin-Ciocalteu反应
黄蛋白反应 |
α-
萘酚和次氯酸钠
硝普钠(亚硝基铁氰化钠)溶于稀氨溶液中
萘醌-[1,2]-4-磺酸钠和亚硫酸氢钠
重氮化的对氨基苯磺酸溶于碱性溶液
水合乙醛酸溶于硫酸中
对二甲基氨基苯醛溶于盐酸中
硝酸汞溶于亚硝酸,加热
磷钼钨酸
煮沸的浓硝酸 |
红
红
红
红
紫
蓝
红
红
黄 |
2.植物体和土壤的部分元素含量的比较
表7 植物体和土壤部分元素含量比较表
|
元素 |
植物的平均组成
(新鲜物重量比例)/% |
土壤的平均
组成/% |
|
C
H
Ca
K
N
Si
Mg
P
S
Na
Cl
Fe |
70
18
10.5
0.5
0.3
0.3
0.2
0.04
0.07
0.05
0.02
0.02
0.01 |
50
2
-
1.4
1.5
0.1
34
0.6
0.1
0.05
0.7
0.01
4 |