3.检测生物组织中糖类、脂肪、蛋白质的其他简易方法

(1)检测生物组织中糖类的其他简易方法

Molisch反应(α- 萘酚反应)  此方法是鉴定糖类最常用的颜色反应。它的原理是:糖类在浓酸作用下所形成的糠醛及其衍生物可以与α- 萘酚作用,形成红紫色复合物。由于在糖溶液与浓硫酸两液面间出现红紫色的环,因此又称紫环反应。α- 萘酚也可用麝香草酚或其他的苯酚化合物代替,麝香草酚溶液比较稳定,其灵敏度与α- 萘酚一样。除了糖类之外,各种糠醛衍生物、葡萄糖醛酸、丙酮、甲酸、乳酸等都可以呈现近似的阳性反应。因此,阴性反应证明没有糖类物质的存在;而阳性反应只能说明有糖类存在的可能。

蒽酮反应  糖类经浓酸水解,脱水生成的糠醛及其衍生物与蒽酮(10-酮-9,10-二氢蒽)反应生成蓝绿色复合物。

Benedict反应  班氏试剂是斐林试剂的改良(也是含有Cu2+的碱性溶液),能使具有自由醛基或酮基的糖类氧化,其本身则变成砖红色或黄色的Cu2O,可用来测定还原糖的存在。它利用柠檬酸作为Cu2+的络合剂,其碱性比斐林试剂弱,灵敏度高,干扰因素少,因而在实际应用中有更多的优点。

Bial反应(甲基间苯二酚反应)  戊糖与浓盐酸加热形成糠醛,在有Fe3+存在的条件下,它与甲基间苯二酚(地衣酚)缩合,形成深蓝色的沉淀物(此沉淀物溶于正丁醇)。己糖也能发生反应,产生灰绿色甚至棕色的沉淀物。

(2)检测生物组织中脂肪的其他简易方法

油点试验(spot test)  将含有脂肪的混合物磨碎后擦在一片滤纸(或牛皮纸)上,然后朝向光源观看,应该有半透明的油点出现。此油点不能挥发掉。当滤纸浸过苯(或醚、异丙醇等)后,油点消失;或将混合物磨碎后溶于苯液中,然后过滤。取一滤纸放入滤液中,取出后让苯挥发,朝向光源观看,如有半透明油点存在,则证明混合物中含有脂肪。

乳液形成试验(emulsion test)  将一含有脂肪的混合物溶液稍微加热,加入少量乙醇,摇匀后静置。脂肪可分散成许多微粒,形成白色乳状液。

(3)检测生物组织中蛋白质的其他简易方法

对各种氨基酸特异的某些颜色反应(见表8),可用来检测含有这些氨基酸的蛋白质。这些颜色反应包括Millon反应、黄蛋白反应、茚三酮反应以及Hopkins-Cole(水合乙醛酸)反应等。

Millon反应  米伦试剂为硝酸、亚硝酸、硝酸汞、亚硝酸汞的混合物,能与单酚及双酚和吲哚衍生物产生颜色反应,但不能检验尿蛋白。

茚三酮反应  蛋白质、多肽和各种氨基酸具有茚三酮反应。除无α?氨基的脯氨酸和羟脯氨酸呈黄色外,其他氨基酸生成紫红色,最终为蓝色化合物。

黄蛋白反应  它是芳香族氨基酸,特别是酪氨酸和色氨酸蛋白质所特有的颜色反应。

表8 部分氨基酸的颜色反应 

所测定的氨基酸
名称
试剂
颜色
精氨酸 半胱氨酸 半胱氨酸 组氨酸,酪氨酸 色氨酸 色氨酸 酪氨酸 酪氨酸 酪氨酸,色氨酸 苯丙酪氨酸
Sakaguchi(坂口)反应 硝普盐反应 Sullivan反应 Pauly反应 水合乙醛酸反应 (Hopkins-Cole反应) Ehrlich反应 Millon反应 Folin-Ciocalteu反应 黄蛋白反应
α- 萘酚和次氯酸钠 硝普钠(亚硝基铁氰化钠)溶于稀氨溶液中 萘醌-[1,2]-4-磺酸钠和亚硫酸氢钠 重氮化的对氨基苯磺酸溶于碱性溶液 水合乙醛酸溶于硫酸中 对二甲基氨基苯醛溶于盐酸中 硝酸汞溶于亚硝酸,加热 磷钼钨酸 煮沸的浓硝酸
红 红 红 红 紫 蓝 红 红 黄

 0  180791  180799  180805  180809  180815  180817  180821  180827  180829  180835  180841  180845  180847  180851  180857  180859  180865  180869  180871  180875  180877  180881  180883  180885  180886  180887  180889  180890  180891  180893  180895  180899  180901  180905  180907  180911  180917  180919  180925  180929  180931  180935  180941  180947  180949  180955  180959  180961  180967  180971  180977  180985  447348 

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