下面是某研究小组开展的“猪血浆某白蛋白的提取及分子量测定”研究,请协助完成有关问题:
材料仪器:新鲜猪血、低速冷冻离心机、透析袋、电泳仪等.
化学试剂:pH为7.4的缓冲液、柠檬酸钠、奈氏试剂(与NH4+反应出现黄色或红棕色沉淀)、饱和(NH42SO4溶液、生理盐水等.
实验步骤:
(1)样品获取:向新鲜猪血中加入
 
,静置一段时间后取上层
 

(2)盐析法粗提蛋白质:
①向血浆中加入一定体积的饱和(NH42SO4溶液,使(NH42SO4的浓度达到50%,充分混合后静置、离心,取沉淀物.
②向沉淀物中加入适量生理盐水使之溶解,再向其中加入一定体积的饱和(NH42SO4溶液,使(NH42SO4的浓度达到33%,充分混合后静置、离心,取沉淀物.
③重复步骤①、②2~3次,最后用生理盐水将沉淀溶解即得粗提品.
盐析粗提“血浆某白蛋白”的主要原理是
 
,重复步骤①、②的主要目的是
 

(3)透析除盐:将粗提品装入透析袋,以pH为7.4的缓冲液作透析液,每隔4h更换一次透析液,每次更换前利用奈氏试剂检测透析液中NH4+的量.利用缓冲液作透析液的目的是
 
.检测中,若观察到透析液
 
时,即可终止透析.
(4)凝胶色谱法分离:透析后的样品经凝胶柱洗脱,获得纯净血浆某白蛋白样品.
(5)分子量测定:化学物质SDS能使蛋白质变性,解聚成单条肽链.在聚丙烯酰胺凝胶电泳中加入一定量的SDS,电泳迁移率完全取决于肽链的分子大小.如图为本实验中用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血浆某白蛋白的结果.根据电泳结果,某同学得出“提取的血浆某白蛋白有两条肽链”的结论,这种说法可靠吗?理由是
 
 0  99518  99526  99532  99536  99542  99544  99548  99554  99556  99562  99568  99572  99574  99578  99584  99586  99592  99596  99598  99602  99604  99608  99610  99612  99613  99614  99616  99617  99618  99620  99622  99626  99628  99632  99634  99638  99644  99646  99652  99656  99658  99662  99668  99674  99676  99682  99686  99688  99694  99698  99704  99712  170175 

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