【题目】科研人员运用两种方法分离杜氏盐藻、球等鞭金藻细胞的叶绿体,并提取叶绿体DNA,主要实验步骤和结果如下,其中SDS能瓦解生物膜,氯仿异戊醇不溶于水且密度均大于水,DNA不溶于氯仿异戊醇。请回答:

步骤①收集藻细胞:将两种藻细胞培养液进行预处理后,离心取沉淀物。

步骤②获取叶绿体粗:提物4℃下分别破碎两种藻细胞后,再分别用差速离心法和密度梯度离心法分离获取叶绿体粗提物(原理示意图如下)。

步骤③去除杂质DNA:向步骤②的叶绿体粗提物中加入DNA酶、缓冲液,37℃静置15min后,离心取沉淀物。

步骤④粗提叶绿体DNA:向步骤③获得的叶绿体中加入缓冲液、SDS、蛋白酶K,60℃水浴2h,离心取上清液。再向上清液中加入氯仿异戊醇,在4℃下离心取 ? 

步骤⑤纯化叶绿体DNA:向粗提溶液中加入3mol·L-1醋酸钠及预冷的95%酒精,低温静置1h后,离心弃上清液。加预冷的95%酒精、离心洗涤1~2次,取沉淀物用超纯水溶解。

步骤⑥DNA纯度和浓度:测定利用分光光度法测量并计算叶绿体DNA的纯度及浓度,结果如上右表(表中OD260/OD280值越接近1.8说明DNA越纯)。

(1)步骤①中预处理时应将藻液置于____处24h,以降低叶绿体中淀粉粒的含量,有利于分离得到完整叶绿体。步骤②在利用差速离心法分离获得叶绿体前,需要先在____(填“低于”“等于”或“高于”)4 000r·min-1下离心去除细胞壁、核物质等。

(2)步骤③依据的主要原理是____,去除的“杂质DNA”来源于____

(3)步骤④中离心后应取____。步骤⑤中用95%的冷酒精离心洗涤过程要注意动作轻缓,其目的是____________________________________________________________

(4)根据实验结果分析,____法较适于分离提取叶绿体DNA,原因是_________________________________________

 0  165019  165027  165033  165037  165043  165045  165049  165055  165057  165063  165069  165073  165075  165079  165085  165087  165093  165097  165099  165103  165105  165109  165111  165113  165114  165115  165117  165118  165119  165121  165123  165127  165129  165133  165135  165139  165145  165147  165153  165157  165159  165163  165169  165175  165177  165183  165187  165189  165195  165199  165205  165213  170175 

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