11.探究如何从土壤中分离自生固氮菌并计数.
实验原理:农田的表层土壤中,自生固氮菌的含量比较多.将用表层土制成的稀泥浆,接种到无氮培养基上进行培养.在这种情况下,只有自生固氮菌才能生长繁殖.
材料用具:农田的表层土壤、无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、盛9mL无菌水的大试管若干、无菌移液管、无菌涂布器、无菌培养皿、盛90mL无菌水的锥形瓶、酒精灯、恒温箱.
方法步骤:
(1)倒平板.分别将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基倒平板,应在酒精灯火焰旁操作.
(2)制备土壤稀释液.取土样10g加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中,充分摇匀.用无菌移液管吸取上清液 1mL,转至9mL无菌水的大试管中,依次稀释到107倍稀释度.为实现无菌操作,试管口和移液管应在离火焰1~2cm处.
(3)涂布.按照由107~103稀释度的顺序分别吸取0.1mL进行平板涂布,每个稀释度下,无氮培养基应至少涂布3个平板,牛肉膏蛋白胨培养基涂布1个平板.
(4)培养.放入恒温箱内,在适宜温度条件下培养3~4d.一般每隔24h统计一次,选取菌落数目稳定时的记录作为结果,这样可以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目.
(5)细菌的计数.选取菌落数在30~300的平板进行计数.如果测试的平均值为50,则每克样品中的菌株数是5×107.(稀释度是105
(6)预期结果.相同稀释度下,牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数多于(填“多于”或“少于”)无氮培养基上的数目.理由是无氮培养基上可以生存和繁殖的只是土壤中的自生固氮菌,而牛肉膏蛋白胨培养基上几乎允许土壤中所有菌类的生存.
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