常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖,自然界中一些酵母菌能分解木糖产生酒精但对酒精的耐受能力较差.下面是利用木糖发酵产生酒精的酿酒酵母的培育过程,请分析回答下列问题:
(1)将自然界中采集到的葡萄带回实验室,用
 
将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中,瓶中的液体经适当稀释后,接种于固体培养基上,在适宜的条件下培养,获得各种菌落.
(2)将培养基上的酵母菌菌株转接到以木糖为唯一碳源的培养基中,无氧条件下培养一周后,有些酵母菌死亡,说明这些酵母菌
 
.从存活的酵母菌提取DNA,从中获取目的基因并用PCR技术大量扩增.这里目的基因是指控制
 
合成的基因
(3)将目的基因连接到一种穿梭质粒上.该质粒既含有大肠杆菌的复制起点pMB1ori,也含有酵母菌复制起点ARS,还具有两种标记基因,即氨苄青霉素抗性基因和尿嘧啶合成酶基因.你认为这种质粒的特点是
 

(4)大肠杆菌被该质粒转化后,应接种于含
 
的培养基上进行筛选.将质粒导入酵母菌时,由于氨苄青霉素不能抑制酵母菌繁殖,应选择缺乏
 
能力的酿酒酵母作为受体菌.
(5)对转基因酿酒酵母发酵能力进行测试,结果如右图所示,据图分析,将转基因酿酒酵母接种在
 
为碳源的培养基中进行发酵能力测试,最初培养基中的葡萄糖被快速消耗,随着发酵继续进行,酿酒酵母能够
 
,说明所需菌株培育成功.
回答下列有关基因工程的问题
图1表示含有目的基因D的DNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列,图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列.现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG.请回答下列问题:

(1).若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段,其产物长度为
 

若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换,那么基因D就突变为基因d.从杂合子分离出图1及其对应的DNA片段,用限制酶SmaⅠ完全切割,产物中共有
 
种不同DNA片段.
(2).若同时用限制酶MspⅠ、MboⅠ切割图2中的质粒,则可得到
 
个DNA片段.
(3).若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行,形成重组质粒,那么应选用的限制酶是
 

为了筛选出成功过导入含目的基因D的重组质粒的大肠杆菌,一般可进行如下步骤筛选
(4).第一步:将大肠杆菌在含
 
的培养基上培养,得到如图1的菌落.
第二步:再将灭菌绒布按到培养基上,使绒布面沾上菌落,然后将绒布按到含
 
的培养基上培养,得到如图2的结果(空圈表示与图1对照无菌落的位置).
第三步:选出图1培养皿中的某些菌落进行培养,即可得到含重组质粒的大肠杆菌.

请在答题纸图3中圈出一个含目的基因的重组质粒的大肠杆菌的菌落?
(5).在选出的大肠杆菌内基因D能成功表达的原因是
 
.其表达产物是一条多肽链,如考虑终止密码,则其至少含有的O原子数为
 
 0  110796  110804  110810  110814  110820  110822  110826  110832  110834  110840  110846  110850  110852  110856  110862  110864  110870  110874  110876  110880  110882  110886  110888  110890  110891  110892  110894  110895  110896  110898  110900  110904  110906  110910  110912  110916  110922  110924  110930  110934  110936  110940  110946  110952  110954  110960  110964  110966  110972  110976  110982  110990  170175 

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