如图是利用基因工程方法生产重组人生长激素的有关资料.图中质粒表示基因工程中经常选用的载体--pBR322质粒,Amp表示青霉素抗性基因,Tet表示四环素抗性基因.根据如图回答下列问题(限制酶Pst,1、EcoR1和HindⅢ切割形成的末端均不相同);

(1)过程②需要
 
酶,得到的cDNA一般比从基因组文库中获得的目的基因要小的多,原因是
 
.过程④需要
 
酶,过程⑤中要提高成功率,常用
 
处理大肠杆菌.
(2)如果用限制酶Pst、EcoRⅠ和HindⅢ对质粒-pBR322进行切割,用一种酶、两种酶和三种酶分别切割时,则形成的DNA片段共
 
种.
(3)基因表达载体除了目的基因和抗性基因外,至少还有
 
等(至少答两个).
(4)如果只用限制酶PstI切割目的基因和质粒pBR322,完成过程④⑤后,将三角瓶内的大肠杆菌(不含Amp′、Tet′抗性质粒)先接种到甲培养基上,形成菌落后用无菌牙签挑取甲上的单个菌落,分别接种到乙和丙两个培养基的相同位置上,一段时间后,菌落的生长状况如图所示.接种到甲培养基上的目的是筛选
 
的大肠杆菌,含有目的基因的大肠杆菌在乙、丙培养基上的存活状态是
 
 
,也可以用
 
方法进行检测.
(5)酵母菌细胞也常常作为基因工程的受体细胞,与大肠杆菌等细胞相比,其优点是在蛋白质合成后,细胞可以对其进行
 
并分泌到细胞外,便于提取.
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