Question

15．在农业生产中发现一种广泛使用的除草剂（含氮有机化合物）在土壤中不易降解，长期使用可导致土壤污染．为修复被该除草剂污染的土壤，可按下面程序选育能降解该除草剂的细菌（已知该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明）．
（1）稀释土壤浸出液时，应在酒精灯火焰附近操作．
（2）要在长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，从营养成分和用途分析，上述培养皿应该是无氮固体培养基中添加了该除草剂．培养基在各种成分都溶化后分装前，要进行的操作是调pH．
（3）对培养基进行灭菌，常采用的方法是高压蒸汽灭菌法．
（4）在固体培养基上形成的菌落中，无透明带菌落利用的氮源主要是氮气（填具体物质名称），有透明带菌落利用的氮源主要是该除草剂（填具体物质名称），据此可筛选出目的菌．
（5）科研人员用放射线处理该细菌获得两个突变株A和B，然后对A和B进行实验，结果如下表：

接种的菌种	一般培养基	实验处理及结果
A	不生长	添加营养物质甲，能生长
B	不生长	添加营养物质乙，能生长
A+B	能生长	不添加营养物质甲、乙就能生长

突变株A不能在一般培养基上生长的直接原因是突变株A缺乏合成营养物质甲所需要的酶．突变株A和B混合在一起接种于一般培养基中就能生长，最可能原因是A生长需要的营养物质甲，B可以提供；B生长需要的营养物质乙，A可以提供．

Answer 1

分析 1、从土壤中筛选分离目的微生物的一般步骤是：土壤取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株．筛选能降解该除草剂的细菌需要以该除草剂为唯一的氮源的选择培养基．
2、图示是筛选分离能降解该除草剂的细菌的过程，所用的接种方法是平板划线法．

解答 解：（1）为了避免杂菌污染，稀释土壤浸出液时，应在酒精灯火焰附近操作．
（2）该除草剂为含氮有机物，为了选育能降解该除草剂的细菌，应采用唯一氮源的选择培养基，即无氮的固体培养基中添加该除草剂；培养基在各种成分都溶化后分装前应先调节pH，然后再灭菌，否则会引入杂菌；
（3）对培养基进行灭菌，最常使用的就是高压蒸汽灭菌法；
（4）由于该除草剂的培养基不透明，被菌落分解后可产生透明带，无透明带说明除草剂未被分解，菌落利用的氮源就只能是空气中的氮气了；而出现透明带说明除草剂被分解，菌落是分解该除草剂的细菌，氮源是该除草剂；
（5）根据题意突变株A在普通培养基中不生长，加营养物质甲可以生长，说明突变株A不能合成突变株A必需的营养物质甲，同理突变株B不能合成突变株B必需的营养物质乙，生物体内的生化反应都需要酶的参与，不能反应就说明缺少相应的酶；而将A+B就可以生长，说明A可以提供B所必需的营养物质乙，B可以提供A所必需的营养物质甲．
故答案为：
（1）酒精灯火焰     
（2）无氮      调pH
（3）高压蒸汽灭菌法   
（4）氮气          该除草剂     
（5）酶     B

点评 解答此类题目的关键是对土壤中微生物的分离这个实验的熟练掌握，和在微生物实验中的无菌操作相关知识的熟练应用．