Question

18．炭疽杆菌能引起人畜患炭疽病．炭疽杆菌两端截平、呈竹节状排列，菌落呈卷发状．对炭疽病疑似患者，可根据噬菌体的寄主专一性，通过实验进行确诊．
细菌培养：采集疑似患者的样本，分离培养，获得可疑菌落．
细菌鉴定：实验流程图如图所示．

（1）对配制的液体培养基要采用髙压蒸汽方法灭菌．培养基配制和灭菌时，灭菌与凋节pH的先后顺序是先调节pH，后灭菌．
（2）挑选可疑菌后进行接种时，放在35℃条件下培养24小时，液体培养基变浑浊，原因是细菌大量繁殖．图中的对照组试管中应加入等量生理盐水．
（3）图中两组试管同时培养6小时后，进行比较，若实验组液体培养基的浑浊度降低（填“提高”、“降低”、“不变”），则可明确疑似患者被炭疽杆菌感染．此实验依据的原理是实验组中的噬菌体能特异性地侵染炭疽杆菌，使细菌死亡，溶液变澄淸．
（4）在对微生物进行扩大培养过程中需要对微生物进行计数．取0.2mL样品，用固体培养基对其培养，最后统计三个平板，菌落数分别是200、180、220．则样品中微生物的数量为1000个/mL．该统计结果低于（填“低于”、“髙于”）实际值．

Answer 1

分析 1、培养基的基本成分：水、无机盐、碳源、氮源及特殊生长因子；
2、无菌操作，包括灭菌和消毒两种方式，消毒的方法有巴氏消毒法、酒精消毒、煮沸消毒法；灭菌的方法有干热灭菌、灼烧灭菌和高压蒸汽灭菌；
3、微生物的接种：微生物接种的方法很多，最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，常用来统计样品活菌数目的方法是稀释涂布平板法．
4、微生物实验室分离中配制培养基的操作步骤：计算→称量→溶解→调pH→灭菌步骤．

解答 解：（1）对培养基灭菌常用高压蒸汽灭菌法；培养基的制备步骤为：计算、称量、溶化、调pH、灭菌和倒平板．
（2～3）接种可疑菌后，35℃培养24小时，细菌大量繁殖，液体培养基变浑浊．对照组试管中应加入等量生理盐水．与实验组同时培养6小时后，由于实验组中的噬菌体能特异性地侵染炭疽杆菌，使细菌死亡，溶液变澄淸，因此若实验组液体培养基的浑浊度比对照组低，则可明确疑似患者被炭疽杆菌感染；反之则排除．
（4）在对微生物进行扩大培养过程中需要对微生物进行计数．取0.2mL样品，用固体培养基对其培养，最后统计三个平板，菌落数分别是200、180、220．则样品中微生物的数量为$\frac{200+180+220}{3}$×$\frac{1}{0.2}$=1000个/mL．由于两个或多个细胞连在一起时，在培养基上只能观察到一个菌落，因此该统计结果低于实际值．
故答案为：
（1）髙压蒸汽       先调节pH，后灭菌
（2）细菌大量繁殖         等量生理盐水
（3）降低    实验组中的噬菌体能特异性地侵染炭疽杆菌，使细菌死亡，溶液变澄淸
（4）1000      低于

点评 本题考查微生物的分离和培养，要求考生识记培养基的种类及功能，掌握培养基的制备过程；识记几种微生物常用的两种方法，能结合所学的知识准确答题．