Question

【题目】【生物——选修1：生物技术与实践】

自生固氮菌是一类能独立固定氮气的细菌，其中有些好氧的种类能产生PHB（一种可以被生物降解的塑料）。现欲获得高产PHB的自生固氮菌菌种，操作流程如下：采集土样→富培养→分离、纯化培养→初步筛选产PHB的自生固氮菌→筛选高产PHB固氮菌→保存备用。回答下列问题：

（1）富集培养时，为达到筛选自生固氮菌的目的，在配制培养液时不应添加_________。培养时要将装有培养液的锥形瓶旋转在摇床上，其目的是_________________。

（2）进行分离、纯化培养时，要先将培养基倒入培养皿中，制成平板。此时所使用的培养基与富集培养时有所不同，其中添加了一定量的_______________。倒平板时，要待高压灭菌后的培养基____________，再在______________附近操作。平板冷凝后，需置于恒温箱中1-2天后再用于接种，目的是______________。

（3）分离纯化培养后，得到8种形态特征有所不同的单菌落。经染色鉴定，其中3种能产生PHB，那么如何进一步筛选出高产PHB的菌种呢？请说出你的实验思路。

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Answer 1

【答案】 含氮物质（或氮源） 为细菌的生长提供充足的氧气 琼脂 冷却至50℃左右（或冷却至不烫手） 酒精灯火焰 选出没被微生物污染的平板 将能产生PBH的3种菌分别接种到相同的培养基上，在相同且适宜的条件下培养相同的时间，检测和比较3种菌的PHB生成量。

【解析】【试题分析】

阅读题干可知，本题综合考查了微生物的培养、分离、纯化和筛选的相关知识，属于容易题。解题的关键是明确知识点，梳理相关知识，根据题目描述结合基础知识做出判断。

（1）由于要筛选自生固氮菌，需要用选择培养基，所以在配制培养液时不应添加含氮物质（或氮源）；由题意可知，该自生固氮菌属于好氧菌，培养时将装有培养液的锥形瓶旋转在摇床上，可以为细菌的生长提供充足的氧气。

（2）平板培养基应为固体培养基，所以在配制时应添加一定量的琼脂，起凝固作用；倒平板时，要待高压灭菌后的培养基冷却至50℃左右（或冷却至不烫手），再在酒精灯火焰附近操作；为选出没被微生物污染的平板，在平板冷凝后，需置于恒温箱中1-2天后再用于接种。

（3）本实验的目的是获得高产PHB的自生固氮菌菌种，因此，可以将能产生PBH的3种菌分别接种到相同的培养基上，在相同且适宜的条件下培养相同的时间，检测和比较3种菌的PHB生成量。