Question

1．科研人员通过基因工程实现了β-甘露聚糖酶基因在猪肠道野生酵母菌中的表达，使原来不能被猪利用的粗纤维在猪肠道内被分解成可直接吸收的单糖．图为构建工程菌的部分过程，其中介导序列能引导载体整合到酵母菌的染色体DNA上．请结合相关知识，回答下列问题：

（1）利用PCR技术从野生酵母菌染色体DNA中获取目的基因的前提是利用一段已知目的基因的核苷酸序列合成引物．
（2）如表为四种限制酶的识别序列和切割位点，用表中四种限制酶切割DNA，能得到相同的黏性末端的是限制酶BamHⅠ和BglⅡ．

限制酶	识别序列和切割位点
EcoR I	↓ GAATTC
BamH I	↓ GGATCC
BglⅡ	↓ AGATCT
Sal I	↓ GTCGAC

（3）在构建介导序列质粒载体时，选用EcoR I和BamH I同时切割质粒和介导序列的目的是避免质粒和介导序列发生自身环化．
（4）在构建重组表达载体时，引入启动子的目的是驱动目的基因转录出mRNA．
（5）对重组表达载体进行酶切鉴定，假设所用的酶均可将识别位点完全切开．若使用EcoR I和Sal I酶切，将得到3种DNA片断．

Answer 1

分析 根据题意和图示分析可知：图示为构建工程菌的部分过程，其中①表示采用PCR技术扩增介导序列的过程；②是用DNA连接酶将质粒载体与介导序列连接形成重组质粒的过程；③表示用DNA连接酶将质粒载体、介导序列质粒载体和克隆载体重新组成形成重组表达载体．

解答 解：（1）利用PCR技术从野生酵母菌染色体DNA中获取目的基因的前提是利用一段已知目的基因的核苷酸序列合成引物．
（2）表中限制酶BamHⅠ和BglⅡ的识别序列不同，但两者切割产生的黏性末端相同，都是GATC．
（3）在构建介导序列质粒载体时，选用EcoRⅠ和BamHⅠ切割质粒和介导序列得到的DNA两端的黏性末端不同，可防止质粒与质粒、介导序列与介导序列之间进行连接，从而避免质粒和介导序列发生自身环化．
（4）启动子是RNA聚合酶识别和结合的位点，能驱动基因转录出mRNA．
（5）由图可知，重组的基因表达载体含有2个EcoRⅠ酶割位点，含有1个SalⅠ酶切位点，因此使用EcoRⅠ和SalⅠ酶切重组质粒可以得到3种DNA片断．
故答案为：
（1）引物  
（2）BamHⅠ和BglⅡ
（3）避免质粒和介导序列发生自身环化
（4）驱动目的基因转录出mRNA  
（5）3

点评 本题结合构建工程菌的部分过程图解，考查基因工程的技术和原理，要求考生识记基因工程的工具和操作步骤，能根据图中和表中信息答题．需要注意的是第（5）题，考生可以将重组表达载体上的酶切位点标出，明确BamHⅠ和BglⅡ切割后的黏性末端能在DNA连接酶的作用下连接起来，但重组序列不能被BamHⅠ或BglⅡ酶割．