题目内容
【题目】角膜缘干细胞能更新角膜上皮细胞，角膜上皮细胞对维持角膜的透明性至关重要．回答下列问题：
（1）将角膜缘组织剪碎，加入______________处理，可获得大量游离分散的细胞．细胞悬液在培养瓶中培养，当贴壁生长的细胞发生_____________现象时停止增殖．
（2）通常角膜缘干细胞的培养控制在10代以内，原因是___________________．
（3）离体培养角膜缘干细胞时，一般需要在合成培养基中加入______________等天然成分，培养时所需的气体主要有________________．
（4）研究发现，细胞因子能够调控角膜缘干细胞分化．放线菌素D能通过阻碍RNA聚合酶的功能进而抑制细胞因子的调控，由此推断该抑制过程发生在___（选填“复制”、“转录”或“翻译”）水平．
（5）研究还发现，皮肤干细胞可以诱导分化为角膜缘干细胞，这体现了皮肤干细胞具有_________________．临床上常用诱导干细胞定向分化的方法修补损伤或衰老的组织器官，从而解决了___________________________________问题。
【答案】胰蛋白酶或胶原蛋白酶 接触抑制 保持细胞正常的二倍体核型 血清（或血浆） O2和CO2 转录 发育的全能性 供体器官不足（或器官移植后免疫排斥）
【解析】
1、动物细胞培养的流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。
2、动物细胞培养需要满足以下条件：①无菌、无毒的环境；②营养；③温度和pH；④气体环境：95%空气+5%CO2。
3、动物细胞培养技术的应用：制备病毒疫苗、制备单克隆抗体、检测有毒物质、培养医学研究的各种细胞。
4、胚胎干细胞的主要用途是：
①可用于研究哺乳动物个体发生和发育规律；
②是在体外条件下研究细胞分化的理想材料。ES细胞在饲养层细胞上或在添加抑制因子的培养液中，能够维持不分化的状态。在培养液中加入分化诱导因子，如牛黄酸、丁酰环腺苷酸等化学物质时，就可以诱导ES细胞定向分化，这为揭示细胞分化和细胞凋亡机理提供了有效的手段；
③可以用于治疗人类的某些顽疾，如帕金森综合症、糖尿病、老年痴呆症、肝衰竭、成骨不良；
④培育各种组织器官，用于器官移植，解决供体器官不足和器官移植后免疫排斥的问题。
（1）将角膜缘组织剪碎，加入胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，可获得大量游离分散的细胞。细胞悬液在培养瓶中培养，当贴壁生长的细胞发生接触抑制现象时停止增殖。
（2）10代以内的细胞能保持细胞正常的二倍体核型，故通常角膜缘干细胞的培养控制在10代以内。
（3）离体培养角膜缘干细胞时，一般需要在合成培养基中加入血清（或血浆）等天然成分，培养时所需的气体主要有O2和CO2。
（4）研究发现，细胞因子能够调控角膜缘干细胞分化。RNA聚合酶是催化DNA转录形成RNA的酶。放线菌素D能通过阻碍RNA聚合酶的功能抑制细胞因子的调控，由此推断该抑制过程发生在转录水平。
（5）研究还发现，皮肤干细胞可以诱导分化为角膜缘干细胞，这体现了皮肤干细胞具有发育的全能性。临床上常用诱导干细胞定向分化的方法修补损伤或衰老的组织器官，从而解决了供体器官不足或器官移植后免疫排斥问题。
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