题目内容
4．（1）限制酶是基因工程必需的工具酶，其特性是一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列．（2）如图1所示的酶M和酶N是两种限制酶，图中DNA片段只注明了黏性末端处的碱基种类，其它碱基的种类未作注明．
（3）酶M特异性剪切的DNA片段是
，则酶N特异性剪切的DNA片段是
．（4）多个片段乙和多个片段丁混合在一起，用DNA连接酶拼接得到环状DNA，其中只由两个DNA片段连接成的环状DNA分子有3种．
（5）如图2的A和B分别表示两段DNA序列．表格分别表示4种限制性核酸内切酶的酶切位点．
| 酶的种类 | 1 | 2 | 3 | 4 |
| 酶切位点 |  |  |  |  |
（7）假设大肠杆菌突变菌株甲中EPSPS基因的右侧序列如图2中B所示，请在图3方框内画出经酶切后产生的两个末端的碱基序列．
．
分析 分析：切割DNA的工具是限制性核酸内切酶，又称限制酶，限制酶是基因工程必需的工具酶，其特性是一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列；依据图M信息及题干相应文字信息，可推出片段甲、乙、丙均有酶1切割形成，所以片段丁、戊是由酶2切割形成的，则酶N特异性剪切的DNA片段是；多个片段乙和多个片段丁混合，用DNA连接酶连接可形成乙乙、乙丁、丁丁三种连接方式（只考虑两个DNA片段连接）；利用表格信息及限制性酶完成（6）（7）．
解答 解答：（1）切割DNA的工具是限制性核酸内切酶，又称限制酶，限制酶是基因工程必需的工具酶，其特性是一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列；
（2）依据图M信息及题干相应文字信息，可推出片段甲、乙、丙均有酶1切割形成，所以片段丁、戊是由酶2切割形成的，则酶N特异性剪切的DNA片段是；
（3）多个片段甲和多个片段乙混合，用DNA连接酶连接可形成乙乙、乙丁、丁丁三种连接方式（只考虑两个DNA片段连接），所以其中只由两个DNA片段连接成的环状DNA分子有3种；
（6）利用表格信息及限制性酶2和限制酶3的酶切位点可推知假设位于EPSPS基因两侧的DNA序列均如图2中A所示，则应选择表格中酶2进行酶切；若位于EPSPS基因两侧的DNA序列分别如图2中A和B所示，则应选择表中酶2和3进行酶切．
（7）假设大肠杆菌突变菌株甲中EPSPS基因的右侧序列如图2中B所示，经酶切后产生的两个末端的碱基序列．
故答案为：
（1）一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列
（3）
（4）3
（6）2 2和3
（7）
点评 本题考查基因工程，理解限制酶的作用特点是解题的关键，同时要求学生具备分析图形的能力．
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