题目内容

【题目】根据基因工程的有关知识,回答下列问题。

(1)限制酶切割DNA分子后产生的片段,其末端类型有:__________和_____________。

(2)质粒用EcoR Ⅰ切割后产生的片段如下:

AATTC……G

G……CTTAA

为使载体与目的基因相连,含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外,还可用另一种限制性内切酶切割,该酶必须具有的特点是_______________。

(3)实际操作中,往往用EcoRⅠ和另一种限制性内切酶同时分别切割质粒和外源DNA分子,其优点在于可防止____。

(4)按其来源不同,基因工程中所使用的DNA连接酶有两类,即___DNA连接酶和___DNA连接酶。

(5)基因工程中除质粒外,___和___也可作为载体。

【答案】黏性末端 平末端 切割产生的DNA片段末端与EcoRⅠ切割产生的相同 质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化 E·coli T4 动植物病毒 λ噬菌体的衍生物

【解析】

基因工程技术的基本工具:

(1)“分子手术刀”——限制性核酸内切酶(限制酶)

①来源:主要是从原核生物中分离纯化出来的。

②功能:能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开,因此具有专一性。

③结果:经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式:黏性末端和平末端。

(2)“分子缝合针”——DNA连接酶

(3)“分子运输车”——载体

①载体具备的条件:能在受体细胞中复制并稳定保存;具有一至多个限制酶切点,供外源DNA片段插入;具有标记基因,供重组DNA的鉴定和选择。

②最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外,并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。

③其它载体:噬菌体的衍生物、动植物病毒。

(1)限制性内切酶切割DNA分子后产生两种类型的末端,即黏性末端和平末端。

(2)根据题意分析,质粒可以用EcoRⅠ切割,也可以用另一种限制酶切割,说明该酶切割产生的DNA片段末端与EcoRⅠ切割产生的相同。

(3)根据题意分析,用不同的限制酶同时分别切割质粒和外源DNA分子,可以防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化,进而使得目的基因准确插入质粒。

(4)基因工程使用的DNA连接酶按来源分,可分为E·coli DNA连接酶和T4DNA连接酶。

(5)基因工程常用的运载体有质粒、动植物病毒和λ噬菌体的衍生物。

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