Question

回答基因工程中的有关问题：（15分）
Ⅰ．限制酶是基因工程中的重要工具酶，下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图甲、图乙中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

（1）一个图甲所示的质粒分子经Sma Ⅰ切割前后，分别含有      个和_______个游离的磷酸基团？
（2）若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越       。
（3）与只使用EcoR I相比较，使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止        。
Ⅱ．原核生物（如大肠杆菌）是基因工程中较理想的受体细胞，它们具有一些其他生物没有的特点：①繁殖快②多为单细胞③______________等优点．大肠杆菌细胞最常用的转化方法是：首先用_________处理细胞，使之成为_________­­___细胞，然后完成转化．
Ⅲ．植物基因工程中将目的基因导入受体细胞最常用的方法是__________,且一般将目的基因插入Ｔi质粒的____________中形成重组Ｔi质粒，这样可将目的基因整合到受体细胞的染色体上，科学家发现：这样得到的转基因植株，其目的基因的传递符合孟德尔遗传规律，则该转基因植株一般为___________子。若要避免基因污染，一般需将目的基因导入植物细胞的__________DNA中。

Answer 1

Ⅰ（1）0  2 （2）高  （3）质粒和含目的基因的外源DNA片断自身环化
Ⅱ遗传物质相对较少  Ca²⁺ 感受态  Ⅲ．农杆菌转化法  T-DNA  杂合 细胞质（线粒体、叶绿体）

解析试题分析：Ⅰ（1）质粒分子经Sma Ⅰ切割前，为环状DNA，无游离磷酸基团，切割后，Sma Ⅰ会2个脱氧核苷酸对（CG）之间的磷酸二酯键，露出2个游离磷酸基团。（2）插入的SmaⅠ酶切位点越多，碱基对CG越多，氢键越多，故质粒的热稳定性越高。（3）只使用EcoR I, 质粒、外源DNA自身都只含有1对互补黏性末端，自身会发生连接成为环状DNA，不利目的基因导入。故使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA，各自会有不同黏性末端，能防止环化。
Ⅱ．原核生物（如大肠杆菌）是基因工程中较理想的受体细胞，具有一些其他生物没有的特点：
繁殖快，能大量快速复制DNA；②多为单细胞，结构简单，容易操作；③遗传物质相对较少，不易对目的基因干扰。大肠杆菌细胞最常用的转化方法是：首先用Ca²⁺处理细胞，使之成为感受态细胞，然后完成转化．
Ⅲ．植物基因工程中将目的基因导入受体细胞最常用的方法是农杆菌转化法。且一般将目的基因插入Ｔi质粒的T-DNA中形成重组Ｔi质粒，这样可将目的基因整合到受体细胞的染色体上。移植入的目的基因为单个，故转基因植株一般为杂合子。要避免基因污染，一般需将目的基因导入植物细胞的细胞质（线粒体、叶绿体），不会随着花粉进行基因污染。
考点：本题考查基因工程相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系能力。