题目内容

20.如图为利用人成纤维细胞(具分裂能力、能在HAT培养基上存活)和小鼠骨髓瘤细胞(具分裂能力、不能在HAT培养基上存活)进行人类基因定位的操作示意图,请回答相关问题.

(1)图示方法是动物细胞融合技术的应用,该技术的基础是动物细胞培养技术.
(2)操作所用的成纤维细胞应传代10代以内,诱导融合时需要加入的促融剂是PEG(或灭活病毒).
(3)人、鼠细胞先经过细胞膜融合形成,再经过一次多(双)核细胞有丝分裂,形成单核细胞.
(4)HAT培养基起选择培养作用,培养时温度应为36.5±0.5℃,操作中加入乌本苷的目的是除去成纤维细胞.
(5)下表所示为杂交细胞A、B、C、D中存在的人类染色体及人类特有的4种酶(+表示存在,-表示不存在),这4种酶均为单基因编码产生,据表推断,编码酶Ⅰ的基因位于1染色体上,编码酶Ⅱ和Ⅳ的基因位于染色体2上.
杂交细胞酶人类染色体
ⅠⅡⅢⅣ123
A-+++-+-
B+-+-+--
C------+
D++-++++

分析 1、分析题图:图示为利用人成纤维细胞(具分裂能力、能在HAT培养基上存活)和小鼠骨髓瘤细胞(具分裂能力、不能在HAT培养基上存活)进行人类基因定位的操作示意图,成纤维细胞和小鼠骨髓瘤细胞在促融剂的作用下形成三种杂交细胞,即成纤维细胞自身融合细胞、小鼠骨髓瘤细胞自身融合的细胞和杂交细胞;在HAT培养基上筛选出成纤维细胞自身融合细胞和杂交细胞;加人鸟本苷的目的是除去成纤维细胞,留下杂交细胞.
2、分析表格:杂交细胞A中存在2号染色体,表达出酶Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ;杂交细胞B存在1号染色体,表达出酶Ⅰ、Ⅲ;杂交C存在3号染色体,不能表达出这四种酶;杂交细胞D存在1、2和3号染色体,表达出酶表达出酶Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ.

解答 解:(1)由图分析,该过程为动物细胞融合,其基础是动物细胞培养.
(2)目前使用的正常细胞通常为10代以内的,因为10代以内的细胞可以保持细胞正常的二倍体核型.诱导两个动物细胞融合的方法:物理(离心、振动、电刺激)、化学(PEG)、生物诱导(灭活的病毒).
(3)人、鼠细胞先经过细胞膜融合形成多核细胞,经过一次有丝分裂,形成单核细胞.
(4)据题干信息,人成纤维细胞能在HAT培养基上存活,而小鼠骨髓瘤细胞不能在HAT培养基上存活,则HAT培养基起选择培养作用,筛选出人成纤维细胞和成纤维细胞融合的杂交细胞;动物细胞培养的适宜温度为36.5±0.5℃;由图可知,操作中加人鸟本苷的目的是除去成纤维细胞,筛选出杂交细胞.
(5)杂交细胞B只存在1号染色体,其表达出酶Ⅰ、Ⅲ,说明编码酶Ⅰ的基因位于1号染色体上;杂交细胞A中只存在2号染色体,但表达出酶Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ,而杂交细胞B只存在1号染色体,也能表达出酶Ⅲ,说明编码酶Ⅱ和Ⅳ的基因位于2号染色体上.
故答案为:
(1)动物细胞融合动物细胞培养
(2)10 PEG(或灭活病毒)
(3)多(双)核细胞有丝分裂
(4)选择 36.5±0.5 除去成纤维细胞
(5)1Ⅱ和Ⅳ

点评 本题结合图标,考查动物细胞工程的相关知识,要求考生识记动物细胞培养的过程及条件;识记动物细胞融合的手段及其应用,能结合图中和表中信息准确答题,属于考纲识记和理解层次的考查.

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(1)图1的a过程目的是获得单一菌落(单菌落),b的接种方法为稀释涂布平板法.
(2)在一定温度下(35℃),一定时间内( 通常为40分钟),凝固1mL10%脱脂奶粉的酶量为一个酶活力单位(U).凝乳酶活力检测结果如图2所示.
①据图2所示,酶催化能力最强的是A6组.
②A2、A5组酶活力与A0组芽孢杆菌相同,有人对此做出了推测:A2、A5组芽孢杆菌虽发生了基因突变,但凝乳
酶蛋白未改变,其依据的理由是一种氨基酸可能对应多种密码子(或基因突变发生在非编码区).为了验证上述假设,可采用DNA分子杂交技术检测凝乳酶基因是否发生了突变.
③将凝乳酶催化能力最强的菌株分离纯化后进行扩大化培养,尽管培养基成分合适、操作正确、培养温度和pH适宜,但凝乳酶的产量比预期偏低.对此,研究人员展开了讨论,认为还有其他因素,如培养时间,请设计一个实验方案对此因素进行探究(实验方案用表格的形式呈现).
分组12345
培养时间(天)12345
凝乳酶的产量(mg)
注:培养温度、pH、培养基等条件均相同且适宜.

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