题目内容
6．如表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的而不重复标注．请回答下列问题．| 限制酶 | BamHⅠ | BclⅠ | Sau3AⅠ | HindⅢ |
| 识别序列及切割位点 |  |  |  |  |
（1）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用限制酶为BclⅠ和HindⅢ，酶切后的载体和目的基因片段通过DNA连接酶作用后获得重组质粒．
（2）若BamHⅠ酶切的DNA末端与BclⅠ酶切的DNA末端可直接被DNA连接酶连接，原因是黏性末端相同，这两种酶都不能（选填“都能”“都不能”或“只有一种能”）切开连接的部位，原因是核苷酸序列不能被BclⅠ和HindⅢ识别切割．
（3）若用Sau3AⅠ切图1质粒最多可能获得7种大小不同的DNA片段．
（4）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加四环素，平板上长出的菌落，常用PCR鉴定，所用的引物组成为图2中引物甲和引物丙．
分析 解答本题的关键在于理解重组质粒中标记基因的作用．选择限制酶需注意插入目的基因时不能破坏标记基因．PCR扩增基因时，两种引物结合的部位相反，延伸的方向相反．限制酶具有特异性，不同的限制酶识别不同的序列，判断某种限制酶能否切割片断，应该据该片段中是否含有限制酶的识别序列．
根据题意和图示分析可知：在质粒上存在BamH I、BclⅠ、BamH I和HindⅢ等四个酶切位点，其中BamH I的切割位点在两个抗性基因上都有，而抗性基因为载体的标记基因，因此不可用该酶切割．在目的基因上，BclⅠ、BamH I、HindⅢ和Sau3AⅠ四种酶也存在酶切位点．
解答 解：（1）选择的限制酶应在目的基因两端存在识别位点，但BamHⅠ可能使质粒中的启动子丢失，且会破坏质粒中的两个抗性基因；Sau3A I在质粒上有三个酶切位点，也会破坏质粒中的两个抗性基因，不利于后期的筛选，所以应选用限制酶为BclⅠ和HindⅢ．选择的限制酶应在目的基因两侧切割，切割后的DNA片段用DNA连接酶连接．
（2）BamHⅠ酶切得DNA末端与BclⅠ酶切得DNA末端可直接被DNA连接酶连接，原因是黏性末端相同（即同尾酶），但是被DNA连接酶连接后便不能再被这两种限制酶切割了，因为不满足两种限制酶对识别序列的特异性要求．
（3）根据BamHⅠ、BclI和Sau3A I的酶切位点，Sau3A I在质粒上有三个酶切位点，完全酶切可得到记为A、B、C三种片段，若部分位点被切开，可得到AB、AC、BC、ABC四种片段，所以用Sau3A I切图1质粒最多可能获得7种大小不同的DNA片段．
（4）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加四环素（根据标记基因的种类），平板上长出的菌落，常用PCR鉴定，所用的引物应具有成对反向的特点．
故答案为：
（1）BclⅠ和HindⅢDNA连接
（2）黏性末端相同 都不能 核苷酸序列不能被BclⅠ和HindⅢ识别切割
（3）7
（4）四环素 引物甲和引物丙
点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握各操作步骤的相关细节，能结合所学的知识准确答题，属于考纲应用和理解层次的考查．
| A． | 血浆的成分稳定时，机体达到稳态 | |
| B． | 在正常情况下，糖原不应该出现在人体内环境中 | |
| C． | 组织液可渗回血浆和渗入淋巴 | |
| D． | 组织液中的蛋白质浓度低于血浆中的蛋白质浓度 |
| A． | 高温下短时间蒸馏 | B． | 高温下长时间蒸馏 | ||
| C． | 低温下短时间蒸馏 | D． | 低温下长时间蒸馏 |
| A． | 突触小体中具有合成某种神经递质的前体物质和酶系 | |
| B． | 神经递质贮存于突触小泡中可防止被胞浆内其他酶系破坏 | |
| C． | 突触间隙中不存在使神经递质失活的酶系或摄取回收机制 | |
| D． | 用神经递质拟似剂或受体阻断剂能加强或阻断递质的信号传递 |
| A． | 酶通过降低化学反应活化能来提高化学反应速率 | |
| B． | 超过酶的最适温度，酶因肽键被破坏而逐渐失活 | |
| C． | 酶在代谢中作为催化剂，其本身的合成也需要酶催化 | |
| D． | 探究温度影响酶活性的实验中，酶与底物应分别保温后再混合 |
| A． | 进入人体后与浆细胞结合，从而抑制其增殖 | |
| B． | 感染的宿主细胞可被相应的效应T细胞识别 | |
| C． | 遗传信息的传递方向为RNA→DNA→RNA→蛋白质 | |
| D． | 遗传物质可直接整合到宿主的染色体上，进而诱发癌变 |
