Question

我国基因工程药物的研制和生产发展迅猛，下图是利用基因工程方法生产人生长激素的示意图。

根据上图回答下列问题（限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ切割形成的末端均不相同）：
（1）过程②必需的酶是__________________酶，过程④必需的酶是_________________酶。⑤为提高成功率，常用        溶液处理大肠杆菌细胞。
（2）为了使目的基因和质粒B定向连接并且有利于受体细胞的筛选，酶1是           。
（3）如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ同时对质粒A进行切割，用一种酶、两种酶和三种酶分别切割时，则形成的DNA片段共     种，含有完整四环素抗性基因的DNA片段的概率是_______。
（4）作为受体的大肠杆菌细胞内，应不含__________基因，以利于筛选出含重组载体的受体菌。
（5）能否利用人的皮肤细胞来完成①过程，为什么？                              。

Answer 1

(1)反转录（逆转录） DNA连接酶   CaCl₂（2）EcoRⅠ  （3）9   1/3
(4)tct^R（四环素抗性）（5）不能利用人的皮肤细胞来完成①过程，因为生长激素基因不在人皮肤细胞中表达，在垂体细胞中表达。

解析试题分析：
（1）过程②是指由RNA获得DNA的过程，为逆转录过程，需要逆转录酶；过程④为目的基因与运载体结合成重组质粒，需要DNA连接酶；⑤为把重组DNA分子导入大肠杆菌中，一般要用CaCl₂溶液处理大肠杆菌细胞。
（2）为了使目的基因和质粒B定向连接，并且有利于受体细胞的筛选，限制酶I与另一端的限制酶PstⅠ不同，分析质粒可知，酶I只能是限制酶EcoRⅠ。
（3）用一种限制酶进行切割，由于3种酶的切割位点不同，因此能得到三种DNA片段；用两种限制酶进行切割时，能得到六种DNA片段；用三种限制酶同时切割，得到的DNA片段共有三种，与用两种酶切割后的片段重复，因此共得到9种片段；这9中片段中，有3种片段含有完整四环素抗性基因，所占比例为1/3。
（4）作为受体的大肠杆菌应该不含标记基因，由于amp^R基因被破坏，tct^R基因为标记基因，故受体菌中不含tct^R基因。
（5）不能用人的皮肤细胞获取生长激素mRNA，因为在人的皮肤细胞中生长激素基因不表达，不能获得生长激素的mRNA。
考点：本题考查基因工程的有关知识，意在考查考生理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。