3、植物细胞工程的基本技术：植物组织培养技术，植物体细杂交技术。

2、植物细胞工程的理论基础：植物细胞的全能性。

1、细胞工程：指应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，通过细胞水平或细胞器水平上的操作，按照人的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品的一门综合科学技术。

15．（1）一定的流动性 （2）SARS病毒感染后产生的效应B细胞,单克隆抗体+抗癌

药物（3）造血干细胞 细胞分化（4）有丝　加倍　龙胆紫 （5）无限增值,产生单

一抗体

课后练习

1D　2C　3D　4C　5B　6B　7A　8D　9D　10A　11D　12B　13C　14D　15D　16C　17A　18ACD　19ABC　20BD  21BCD

22（1）纤维素酶(或果胶酶)（2）rrHH、RRhh（3）置大于800勒克斯光照下培养，收集分化的细胞团 （4）细胞的全能性 II （5）抗体与抗原结合，发挥特异性免疫效应  （6）非典患者　2；（7）液体　动物血清

23（1）每种效应B细胞只能产生一种特异性抗体  　瘤细胞能无限增殖 

（2）动物细胞融合、动物细胞培养　　（3）杂交瘤

（4）抗体是蛋白质，若口服则被消化，使抗体失去其功能　　（5）体液    效应

24（1）不能  因为没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生此种抗体的效应B细胞  （2）细胞融合  灭活的病毒（或聚乙二醇）  双亲细胞的遗传物质  特异性抗体  在体外培养条件下大量繁殖  （3）培养液  小鼠腹水  （4）制备单克隆抗体

25(1)获得能产生相应抗体的B淋巴细胞(2)既能无限增殖，又能产生特定抗体(3)动物细胞融合  动物细胞培养  灭活病毒  (4)动物血清(5)胰蛋白酶  (6)杂交瘤细胞  能产生特定抗体的杂交瘤细胞(7)方法：培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞　　原理：加入氨基嘌呤后，使D合成途径阻断，仅有D合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增殖，但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞可以利用淋巴细胞中的S途径合成DNA而增殖

26（1）相互接触  接触抑制  单层（或一层）     胰蛋白酶 （2）衰老甚至死亡   不死性  降低减少 （3）由于活细胞的膜具有选择透过性，大分子染料不能进入活细胞内，故活细胞不能着色（或由于死细胞的膜丧失了选择透过性，大分子染料能够进入死细胞内而着色） （4）中  （5）冷冻（或超低温、液氮）  酶    新陈代谢

（6）抗原

27 I．有毒物质会使动物细胞发生染色体变异    Ⅲ．(2)①分别放人等量的细胞悬浮液    ③把3个培养瓶放在37℃(或适宜温度)的恒温箱中培养    (3)②加1～2滴龙胆紫溶液染色    (4)有丝分裂中小白鼠正常细胞有丝分裂中期高倍显微照片   Ⅳ．(1)甲、乙两种化学物质均有毒性．且乙的毒性比甲的毒性大  (2)对照动物细胞在正常培养状态下染色体变异频率非常低

28⑴叶绿体   ⑵纤维素酶和果胶酶   ⑶病毒   聚乙二醇（振荡、离心、生物、化学因素等）  ⑷无菌、无毒的环境    营养   温度和pH    气体环境   ⑸组织培养中用到的培养基含有丰富的营养成分，有利于培养物的生长，然而各种杂菌同样也可以在上面迅速生长，所以组织培养过程中污染现象经常发生。培养基一旦被污染，迅速生长的各种杂菌不但会和培养物争夺营养，而且这些杂菌生长的过程中会生成大量对培养物有害的物质，导致培养物迅速死亡（2分）     ⑹由于人们对细胞所需的营养物质还没有完全搞清楚，通常加入血清、血浆等一些天然成分   ⑺动物细胞培养     ⑻无   因为胚胎在母体子宫中完成胚胎发育               

14．（1）纤维素酶和果胶酶    细胞壁  　离心、振动、电激  产生新的细胞壁   （2）植物组织培养    （3）幼龄动物的组织或器官或胚胎   胰蛋白酶    灭活的病毒诱导    杂种细胞    流动性    （4）抗原   效应B细胞、记忆细胞、抗体   骨髓瘤细胞    （5）3   杂交瘤细胞   用特定选择培养基   小鼠腹腔内增殖

　解析：单克隆抗体的制备是利用了杂交瘤细胞具有既能迅速大量繁殖，又能产生专一抗体的特点，单克隆抗体的制备包括诱导骨髓瘤细胞与经免疫的B淋巴细胞融合，经过多次筛选获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞，经体外或体内细胞培养，从细胞培养液或小鼠腹水中获得单克隆抗体，其中重要的技术手段包括动物细胞融合、动物细胞培养等。

 ①                               

②在体外大量繁殖      产生特异性抗体

③动物细胞融合      动物细胞培养

课堂练习

1B　2D　3A　4B　5B　6D　7A　8B　9B　10D　11D　　12BCD　13ABCD

答案

例1：

解析：植物原生质体融合或动物细胞融合均需诱导，诱导方法可以是电刺激等物理方法，聚乙二醇处理等化学方法，动物细胞还常用灭活的病毒诱导融合。去除植物细胞的细胞壁常用纤维素酶和果胶酶，将动物组织分散成单个细胞常用胰蛋白酶。小鼠骨髓瘤细胞和经抗原免疫小鼠的B淋巴细胞融合形成的杂交瘤细胞的主要用途是制备单克隆抗体。某种植物（如：染色体数目为2N），甲乙两品种的体细胞杂种的染色体数目是两品种体细胞染色体数之和（4N），甲乙两品种杂交后代的染色体数目不改变（2N）。  选D

例2：

28、自然界中有一种含有叶绿体的原生动物―眼虫，这说明植物的细胞器同样可以在某些动物细胞中存活。某同学提出问题“动物细胞与植物细胞之间可以实现杂交吗？”他尝试设计出下列具体的实验方案。结合实验方案回答：

实验原理：根据眼虫的特点，动物细胞和植物细胞之间在理论上是可以实现杂交的。实验步骤如下：

（1）①中选的植物材料细胞中，必须有的细胞器是            。

（2）③过程所用的酶是            和                 

（3）④过程除了用电激之外，还可以用         、    　　　  等做诱导因素。

（4）⑤过程动物细胞体外培养需要满足的条件是      、       、     、     。

（5）在整个实验过程中，要强调所用的器械的灭菌和实验人员的无菌操作，原因是          

                                                                       。

（6）在⑤⑥过程中，通常要添加血清，原因是                                。

（7）如果让动植物杂交种批量培养生产，可以用           技术。

（8）动植物杂交种细胞是否有细胞壁？       。理由是                       。

（1）经研究人员实验得知，A、B、C三个培养瓶的Q值依次为：QA=1.3%，QB=12.5%，QC=0.1%，由此可知该实验的结论是                                         。

（2）在实验中，C培养瓶起                         作用，C瓶的Q值说明         

                                                                       。　　

27、现有甲、乙两种可能有一定毒性的化学物质，实验室研究人员欲通过动物细胞培养的方法来鉴定它们是否有毒性并比较二者毒性的强弱。请你以一个研究人员的身份参与此项研究，完成下列有关问题。   

 Ⅰ．实验原理：                                                    

根据这种变异细胞占全部培养细胞的百分数(以下称Q值)，可判断该化学物质的毒性。

 Ⅱ．材料用具：活的小白鼠胚胎、胰蛋白酶液、动物细胞培养液、动物细胞固定液、适宜浓度的龙胆紫溶液、适宜浓度的化学物质甲溶液、适宜浓度的化学物质乙溶液、蒸馏水、滴管、培养皿、剪刀、锥形瓶、恒温箱、载玻片、盖玻片、显微镜、小白鼠正常有丝分裂各时期的高倍显微照片。

 Ⅲ．实验步骤：

 (1)制备细胞悬浮液。

把活的小白鼠胚胎放在培养皿中剪碎，转入锥形瓶中，加入胰蛋白酶液处理，使胚胎组织离散成单个细胞，再加入动物细胞培养液，制成细胞悬浮液。

 (2)进行细胞培养。

①取A、B、C 3个洁净的培养瓶，                        ；

②A、B两个培养瓶中分别加入等量的甲、乙溶液。C瓶中加入等量的蒸馏水，摇匀；

③                                                        

(3)制作临时装片。

①当细胞增殖到大约8代左右时，同时从恒温箱中取出3个培养瓶，用胰蛋白酶液处理，加入动物细胞固定液，迅速杀死细胞并固定细胞分裂相；

②静置一段时间后，分别从各培养瓶底部吸取适量的细胞悬浮液，滴在与培养瓶有相同编号的载玻片的中央，                                    ，3min~5min后，盖上盖玻片。

（4）镜检和统计

把临时装片放在显微镜下，先用低倍镜后用高倍镜，寻找处于             期的细胞，并与                  进行对比，统计并计算该期变异的细胞占该期细胞总数的百分数(Q值)。

Ⅵ.结果分析与结论：