Question

【题目】下表中甲、乙分别是分离两种土壤中微生物的培养基的配方，图丙所示为相关分离过程。请回答下列问题（注：水解酪素，即水解酪蛋白，由酪蛋白水解得到）：

KH2PO4	1.4g	纤维素粉	5.0g
Na2HPO4	2.1g	NaNO3	1.0g
MgSO4·7H2O	0.2g	Na2HPO4	1.2g
葡萄糖	10.0g	KH2PO4	0.9g
尿素	1.0g	MgSO4·7H2O	0.5g
琼脂	15.0g	KCl	0.5g
		酵母膏	0.5g
		水解酪素	0.5g
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL		将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL
甲		乙

（1）甲培养基中提供氮源的物质是________。

（2）如果将乙培养基配制成固体培养基，则在该培养基上长出的菌落是否都能分解纤维素？________（填“是”或“否”）。如果培养基中加入________可以筛选出具有分解纤维素能力的菌株，同时透明圈越________（填“大”或“小”），表示该菌分解纤维素的能力越强。

（3）为了计数微生物的数量，图丙采用_______法进行接种培养计数，除此之外，还可以采用_______法进行计数。其中前一种计数方法所得结果要比后一种计数方法所得结果_____（填“大”或“小”）。

（4）一位同学利用图丙的方法步骤在4个平板培养基上分别接种0.1mL土壤稀释液④，培养后菌落数分别为180、155、176、129个，则每克土壤样品中微生物数量约为________________个。

Answer 1

【答案】尿素 否 刚果红 大 稀释涂布平板 显微镜直接计数（或血球计数板计数） 小 1.6×108个

【解析】

本题旨在考查培养基的基本成分，纤维素分解菌的的分离与统计等知识。相关知识：1稀释涂布法当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，其统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，计算公式为每克样品中的菌株数 = （C÷V）×M。.2.在含有纤维素的培养基中加人刚果红时，刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红—纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。这样，就可以通过是否产生透明圈来筛选出具有分解纤维素能力的菌株；可通过观察透明圈大小判断菌株分解纤维素的能力，透明圈越大，纤维素被分解的就越多，说明菌株分解纤维素的能力越强。

（1）培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源（提供碳元素的物质）、氮源（提供氮元素的物质）和无机盐。其中氮源一般是含氮的化合物，根据甲培养基的配方，甲培养基中提供氮源的物质是尿素。

（2）如果将乙培养基配制成固体培养基，则在该培养基上长出的菌落不一定都能分解纤维素，有可能利用水解酪素等能提供碳源，也有可能纤维素被分解后产生的糖类等也可为其它微生物生长提供碳源等。如果在含有纤维素的培养基中加人刚果红时，刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红—纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。这样，就可以通过是否产生透明圈来筛选出具有分解纤维素能力的菌株；同时透明圈越大，表示该菌分解纤维素的能力越强。

（3）纯化微生物可以用稀释涂布法和平板划线法，其中稀释涂布法能用于微生物的计数。稀释涂布法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。除了上述的活菌计数法外，显微镜直接计数（或血球计数板计数）也是测定微生物数量的常用方法。所以，图丙采用了稀释涂布法进行接种培养计数，除此之外，还可以采用显微镜直接计数法进行计数。其中前一种计数方法所得结果要比后一种计数方法所得结果小。

（4）为了保证结果准确，稀释涂布法统计一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。一位同学利用图丙的方法步骤在4个平板培养基上分别接种0.1mL土壤稀释液④，培养后菌落数分别为180、155、176、129个，四个数值都符合统计要求，稀释倍数为106倍，则每克土壤样品中微生物=（180+155+176+129）/4×106=1.6×108个。