如图为月季花药离体培养产生花粉植株的一种途径。请回答下列相关问题。

（1）一般来说，在       期，细胞核由中央移向细胞一侧，花药培养成功率最高。确定花粉发育时期一般用        法染色，然后通过         确定花粉是否处于适宜的发育期。

（2）通过花药培养产生花粉植株，一般有两种途径，即通过胚状体阶段发育为植株和通过愈伤组织发育为植株，通过哪条途径实现，主要取决于培养基中              。

（3）灭菌后的花蕾，在剥离花药时，要彻底去除花丝，这是因为与花丝相连的花药不利于

                   的形成。

（4）若欲获取大量抗性基因导入愈伤组织细胞，可以采用PCR技术。PCR技术利用了    

            原理，通过控制温度来控制DNA双链的解聚与结合。为了避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管等用具在使用前必须进行             。

（5）微生物的实验室培养与以上植物组织培养过程不同，但也需要非常严格的操作。使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子)操作称为               ，常用的消毒方法有                                           等方法(答出三种)。

（共14分）如图为通过花药培养月季花粉植株的一种途径。请回答下列相关问题。

如图为月季花药离体培养产生花粉植株的一种途径。请回答下列相关问题。

（1）一般来说，在      期，细胞核由中央移向细胞一侧，花药培养成功率最高。确定花粉发育时期一般用       法染色，然后通过        确定花粉是否处于适宜的发育期。
（2）通过花药培养产生花粉植株，一般有两种途径，即通过胚状体阶段发育为植株和通过愈伤组织发育为植株，通过哪条途径实现，主要取决于培养基中             。
（3）灭菌后的花蕾，在剥离花药时，要彻底去除花丝，这是因为与花丝相连的花药不利于
                  的形成。
（4）若欲获取大量抗性基因导入愈伤组织细胞，可以采用PCR技术。PCR技术利用了    
           原理，通过控制温度来控制DNA双链的解聚与结合。为了避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管等用具在使用前必须进行            。
（5）微生物的实验室培养与以上植物组织培养过程不同，但也需要非常严格的操作。使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子)操作称为              ，常用的消毒方法有                                          等方法(答出三种)。

在生物技术实践过程中，往往需要注意某些实验步骤的操作，请将下列实验中的注意事项填写完整：

（1）在腐乳的制作时，用来腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干净后要用           消毒。

（2）在“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”课题中，往往需要稀释土壤溶液，为了避免杂菌污染，此过程每一步都要在           旁操作。

（3）在提取植物细胞的DNA时，需要先用洗涤剂溶解           。

（4）在花药离体培养中剥离花药时，要彻底去除           ，因为与其相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。

（5）为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管、枪头、缓冲液和蒸馏水等在使用前必须进行           。

（6）在固定化酵母细胞中加热溶解海藻酸钠时，最好采用           的方法。

（7）在血红蛋白的提取和分离中，若红细胞的洗涤次数过少，将无法除去           。

（8）胡萝卜素提取的萃取过程应采用           加热，因为有机溶剂都是易燃物。

回答基因工程中的有关问题：（15分）

Ⅰ．限制酶是基因工程中的重要工具酶，下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图甲、图乙中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

（1）一个图甲所示的质粒分子经Sma Ⅰ切割前后，分别含有       个和_______ 个游离的磷酸基团？

（2）若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越        。

（3）与只使用EcoR I相比较，使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止         。

Ⅱ．原核生物（如大肠杆菌）是基因工程中较理想的受体细胞，它们具有一些其他生物没有的特点：①繁殖快②多为单细胞③______________等优点．大肠杆菌细胞最常用的转化方法是：首先用_________处理细胞，使之成为_________­­___细胞，然后完成转化．

Ⅲ．植物基因工程中将目的基因导入受体细胞最常用的方法是__________,且一般将目的基因插入Ｔi质粒的____________中形成重组Ｔi质粒，这样可将目的基因整合到受体细胞的染色体上，科学家发现：这样得到的转基因植株，其目的基因的传递符合孟德尔遗传规律，则该转基因植株一般为___________子。若要避免基因污染，一般需将目的基因导入植物细胞的__________DNA中。