根据模拟制作重组DNA分子的活动，甲DNA分子、乙DNA分子被EcoRI酶切后，即可获得所需的目的基因和质粒，回答以下问题：（已知EcoRI酶识别序列为GAATTC，识别位点为G||A）

（1）绿色硬纸板（甲DNA分子）的碱基序列为：      

……ATAGCATGCTATCCATGAATTCGGCATAC……     

……TCCTAGAATTCTCGGTATGAATTCCATAC……

红色硬纸板（乙DNA分子）的碱基序列为：

  ……TATCGTACGATAGGTACTTAAGCCGTATG……      

……AGGATCTTAAGAGCCATACTTAAGGTATG……      

其中，           DNA分子含有“目的基因”，            DNA分子是“质粒”。

（2）用剪刀代表进行切割。酶切位点在         （a处还是b处），此化学键称为              。

（3）请用“||”在甲、乙两DNA分子上标出EcoRI的作用位点。

（4）从基因文库中获取目的基因是常用方法，基因文库实际上就是指导入了某种生物不同基因的许多DNA片断的                         的群体。按照其中所含基因的量又可分为               文库和              文库。

（5）基因表达载体的构建是基因工程的关键步骤之一，请根据所给的条件完成下列问题：

     已知有4种限制性核酸内切酶，其中1号和4号切割DNA后产生的是平末端，2和3号酶产生的是黏性末端。含目的基因的DNA片段和质粒的酶切序列如下图所示：

① 请设计酶切方案，构建最佳基因表达载体（重组质粒）                                                                     。

②该重组质粒上有几个复制原点：    ，能用PCR技术扩增吗      （能或不能）

③若用酶2和3切割重组质粒，可以得到几个DNA片段：         。

  若用酶2和1切割重组质粒，可以得到几个DNA片段：         。

（08衡阳八中模拟）I. （16分）为研究酵母菌发酵的产物，某研究小组设计了如图所示的装置图。①号、②号试管中均加入3mL蒸馏水和少许0．1％溴麝香草酚蓝（简称BTB），直至溶液呈蓝绿色时为止。（当环境偏酸性时，BTB溶液呈黄色）请回答下列问题：

（1）该实验是否可以去掉②号试管?_______。请说明理由：                           。

（2）①号试管的现象是____________，其作用是_______________。

（3）该实验中需要等到煮沸的葡萄糖液冷却后才能加酵母菌，原因是________________。

（4）图乙中哪条曲线能正确表示气泡释放速率的变化？___________。

（5）若要证明释放的气泡是酵母菌所产生的，就需要设置一个对照实验，该对照实验应在原实验的基础上做哪些改动？______________________。

Ⅱ．我国科学家根据农业的需要，将一种来自螺旋藻中的与光合作用相关的基因移植到普通水稻基因中，该转基因水稻的生长周期显著缩短，光合作用速率增长70％，淀粉含量大幅增加，达到了周期短、见效快、粮食增产的目的。   

（1）在该基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，以便于重组和筛选。已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是―^↓GATC―，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是 ―G^↓GATCC―，根据图示判断，正确的操作应该是用___________切割质粒，用______________来切割目的基因片段。

（2）为了避免转基因水稻携带的目的基因通过花粉传递给近缘物种，最好将该基因植入水稻细胞的____________的DNA中。

（3）简要写出确定“螺旋藻基因是转移到水稻的叶绿体内还是转移到染色体上?”的步骤。

回答下列关于基因工程的问题。
草甘膦是一种广谱除草剂，其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，最终导致植物死亡。但是，它的使用有时也会影响到植物的正常生长。目前，已发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因，若将该基因转入植物细胞内，从而获得的转基因植物就能耐受高浓度的草甘膦。
下图A-F表示6株植物，其中，植物A和D对草甘膦敏感，B和E对草甘膦天然具有抗性，C和F则经过了转基因处理，但是是否成功还未知。图1和2分别表示两段DNA序列。表格中1-4分别表示4种限制性核酸内切酶的酶切位点。据图回答下列问题：
.


（1）若A-C浇清水，D-F浇的水中含有草甘膦，上述植物中，肯定能健康成长的是_________。
（2）若要从大肠杆菌中筛选出含EPSPS基因的突变菌株甲，在大肠杆菌培养基中还必须加入 ___________。
（3）假设位于EPSPS基因两侧的DNA序列均如图I所示，则应选择表中酶__________进行酶切；若位于EPSPS基因两侧的DNA序列分别如图I和II所示，则应选择表中酶__________ 进行酶切。
（4）假设大肠杆菌突变菌株甲中EPSPS基因的右侧序列如图II所示，请在方框内画出经酶切后产生的两个末端的碱基序列。（2分）

（5）假设EPSPS基因已被成功转移到植物F中，但植物F仍没有表现出抗性，分析可能的原因_______________________________________________________________。
下图甲是某目的基因（4.0kb，1kb=1000对碱基）与大肠杆菌pUC18质粒（2.7kb）重组的示意图。图中Ap′是抗氨苄青霉素基因，lacZ是显色基因，其上的EcoRI识别位点位于目的基因插入位点的右侧，其控制合成的物质能使菌落呈现蓝色。（图乙中深色圆点即为蓝色菌落）

（6）图乙的培养基中含有氨苄青霉素，请判断图乙中所出现的白色和蓝色两种菌落中，何种会含有重组质粒。___________。
（7）现用EcoRI酶切质粒，酶切后进行电泳观察，若出现长度为_________kb和      kb的片段，则可以判断该质粒已与目的基因重组成功。（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRI的识别位点之间的碱基对忽略不计）

回答下列关于基因工程的问题。

草甘膦是一种广谱除草剂，其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，最终导致植物死亡。但是，它的使用有时也会影响到植物的正常生长。目前，已发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因，若将该基因转入植物细胞内， 从而获得的转基因植物就能耐受高浓度的草甘膦。

下图A-F表示6株植物，其中，植物A和D对草甘膦敏感，B和E对草甘膦天然具有抗性，C和F则经过了转基因处理，但是是否成功还未知。图1和2分别表示两段DNA序列。表格中1-4分别表示4种限制性核酸内切酶的酶切位点。据图回答下列问题：

（1）若A-C浇清水，D-F浇的水中含有草甘膦，上述植物中，肯定能健康成长的是_________。

（2）若要从大肠杆菌中筛选出含EPSPS基因的突变菌株甲，在大肠杆菌培养基中还必须加入 ___________。

（3）假设位于EPSPS基因两侧的DNA序列均如图1所示，则应选择表中酶__________进行酶切；若位于EPSPS基因两侧的DNA序列分别如图1和2所示，则应选择表中酶__________ 进行酶切。

（4）假设大肠杆菌突变菌株甲中EPSPS基因的右侧序列如图2所示，请在方框内画出经酶切后产生的两个末端的碱基序列。（2分）

（5）假设EPSPS基因已被成功转移到植物F中，但植物F仍没有表现出抗性，分析可能的原因_____________。

下图甲是某目的基因（4.0kb，1kb=1000对碱基）与大肠杆菌pUC18质粒（2.7kb）重组的示意图。图中Ap′是抗氨苄青霉素基因，lacZ是显色基因，其上的EcoRI识别位点位于目的基因插入位点的右侧，其控制合成的物质能使菌落呈现蓝色。（图乙中深色圆点即为蓝色菌落）

（6）图乙的培养基中含有氨苄青霉素，请判断图乙中所出现的白色和蓝色两种菌落中，何种会含有重组质粒。___________。

（7）现用EcoRI酶切质粒，酶切后进行电泳观察，若出现长度为_________kb和       kb的片段，则可以判断该质粒已与目的基因重组成功。（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRI的识别位点之间的碱基对忽略不计）

回答下列关于基因工程的问题。

草甘膦是一种广谱除草剂，其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，最终导致植物死亡。但是，它的使用有时也会影响到植物的正常生长。目前，已发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因，若将该基因转入植物细胞内，从而获得的转基因植物就能耐受高浓度的草甘膦。

下图A-F表示6株植物，其中，植物A和D对草甘膦敏感，B和E对草甘膦天然具有抗性，C和F则经过了转基因处理，但是是否成功还未知。图1和2分别表示两段DNA序列。表格中1-4分别表示4种限制性核酸内切酶的酶切位点。据图回答下列问题：

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（1）若A-C浇清水，D-F浇的水中含有草甘膦，上述植物中，肯定能健康成长的是_________。

（2）若要从大肠杆菌中筛选出含EPSPS基因的突变菌株甲，在大肠杆菌培养基中还必须加入 ___________。

（3）假设位于EPSPS基因两侧的DNA序列均如图I所示，则应选择表中酶__________进行酶切；若位于EPSPS基因两侧的DNA序列分别如图I和II所示，则应选择表中酶__________ 进行酶切。

（4）假设大肠杆菌突变菌株甲中EPSPS基因的右侧序列如图II所示，请在方框内画出经酶切后产生的两个末端的碱基序列。（2分）

（5）假设EPSPS基因已被成功转移到植物F中，但植物F仍没有表现出抗性，分析可能的原因_______________________________________________________________。

下图甲是某目的基因（4.0kb，1kb=1000对碱基）与大肠杆菌pUC18质粒（2.7kb）重组的示意图。图中Ap′是抗氨苄青霉素基因，lacZ是显色基因，其上的EcoRI识别位点位于目的基因插入位点的右侧，其控制合成的物质能使菌落呈现蓝色。（图乙中深色圆点即为蓝色菌落）

（6）图乙的培养基中含有氨苄青霉素，请判断图乙中所出现的白色和蓝色两种菌落中，何种会含有重组质粒。___________。

（7）现用EcoRI酶切质粒，酶切后进行电泳观察，若出现长度为_________kb和      kb的片段，则可以判断该质粒已与目的基因重组成功。（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRI的识别位点之间的碱基对忽略不计）