(5分)根据实验原理和材料用具,设计实验选择载体质粒,明确质粒的抗菌素基因所抗的抗菌素类别。
①实验原理:作为载体的质粒,须有标记基因,这一标记基因是抗菌素抗性基因。故凡有抗菌素抗性的细菌,其质粒才可用作载体。
②材料用具:青霉素、四环素的10万单位溶液、菌种试管、灭菌的含细菌培养基的培养皿、酒精灯、接种环、一次性注射器、蒸馏水、恒温箱。
③方法步骤
第一步:取三个含细菌培养基的培养皿并标为1、2、3号,在酒精灯旁,用三支注射器,分别注入1mL蒸馏水、青霉素液、四环素液,并使之分布在整个培养基表面。
第二步:将接种环在酒精灯上灼烧,并在酒精灯火旁取菌种,对三个培养皿分别接种。
第三步:将接种后的三个培养皿放入37℃恒温箱培养24h。
④预期结果:
①____________________________________;
②____________________________________;
③____________________________________;
④____________________________________;
⑤____________________________________。

(18分)2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白(GFP)方面做出突出贡献的科学家。绿色荧光蛋白能在蓝色或紫外光的激发下发出荧光,这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况,帮助推断蛋白质的功能。下图为我国首例绿色荧光蛋白(GFP)转基因克隆猪的培育过程示意图,据图回答:
(1)图中通过过程①、②形成重组质粒,需要限制酶切取目的基因、切割质粒。限制酶I的识别序列和切点是—G↓GATCC—,限制酶II的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶I的一个切点,在目的基因的两侧各有一个酶II的切点。
①请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。
②请画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端。
③在DNA连接酶作用下,上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来____,理由是:________________________________。
(2)过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时,采用最多也是最有效的方法是________。
(3)从分子水平上,检测绿色荧光蛋白基因是否插入到猪胎儿成纤维染色体的DNA上,检测方法是____________,检测绿色荧光蛋白基因是否表达,检测方法是____________。
(4)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上,GFP基因可以作为表达载体上的________。获得的转基因猪,可以解决的医学难题是可以避免________________。

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