（16分）基因工程是在现代生物学、化学和工程学基础上建立和发展起来的，并有赖于微生物学理论和技术的发展运用。基因工程基本操作流程如下图，

请据图分析回答：
（1）图中A是         ；在基因工程中，需要在               ＿＿＿＿＿酶的作用下才能完成剪接过程。
（2）在上述基因工程的操作过程中，可以遵循碱基互补配对原则的步骤有        。（用图解中序号表示

（11分）目前基因工程所用的质粒载体主要是以天然细菌质粒的各种元件为基础重新组建的人工质粒，pBR322质粒是较早构建的质粒载体，其主要结构如图一所示。

(1)构建人工质粒时要有抗性基因，以便于________。观察上图，如果A为质粒，则C表示       。
(2)pBR322分子中有单个EcoRⅠ限制酶作用位点，EcoRⅠ只能识别序列—GAATTC—，并只能在G与A之间切割。若在某目的基因的两侧各有1个EcoRⅠ的切点，请画出目的基因两侧被限制酶EcoRⅠ切割后所形成的黏性末端。
_______________________________________________________________________
(3)pBR322分子中另有单个的BamHⅠ限制酶作用位点，现将经BamHⅠ处理后的质粒与用另一种限制酶BglⅡ处理得到的目的基因，通过____________作用恢复________________________键，成功地获得了重组质粒。能形成重组质粒的原因是_______________________________________________________________________
(4) 作为受体大肠杆菌应不含_______________________，以方便筛选已导入重组质粒的受体大肠杆菌。将大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养，得到如图二的菌落。再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图三的结果(空圈表示与图二对照无菌落的位置)。与图三空圈相对应的图二中的菌落表现型是_______，图三结果显示，多数大肠杆菌导入的是______________。
（5）基因工程中使用的限制酶，其特点是_______________________，下图四种质粒含有E1和E2两种限制酶的识别，Apr表示抗青霉素的抗性基因，Tcr表示抗四环素的抗性基因。

将两端用E1切开的Tcr基因与用E1切开的质粒X－1混合连接，连接后获得的质粒类型有＿＿＿。（可多选）

(7分)人体细胞内含有抑制癌症发生的p53基因，生物技术可对此基因的变化进行检测。
（1）检测基因前要通过PCR进行DNA的扩增。PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶，下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的功能，这是因为_____________________________________________________________________。                          
（2）下图表示从正常人和患者体内获取的p53基因的部分区域。与正常人相比，患者在该区域的碱基会发生改变，在上图中用方框圈出发生改变的碱基对；这种变异被称为___________________。


（3）已知限制酶E识别序列为CCGG，若用限制酶E分别完全切割正常人和患者的p53基因部分区域(见上图)，那么正常人的会被切成______个片段；而患者的则被切割成长度为______对碱基和______对碱基的两种片段。
（4）如果某人的p53基因部分区域经限制酶E完全切割后，共出现170、220、290和460碱基对的四种片段，那么该人的基因型是________(以P⁺表示正常基因，P^-表示异常基因。

（10分）下图是胚胎工程技术研究及应用的相关情况，其中供体1是良种荷斯坦高产奶牛，供体2是黄牛，请据图回答下列问题：

（1）应用1中获得的小牛，其遗传物质来源于             ，为一次获得多个细胞B，往往需要向供体2内注入的是促性腺激素，而不是性激素，原因是               。
（2）将优良公牛的精子收集后放在一定浓度的肝素溶液中进行培养，其目的是                   。
（3）通过应用2获得小牛，涉及到胚胎工程的最后一道“工序”是           。
（4）应用3中的细胞D取自囊胚的           ，细胞C取自牛胎儿的          。
（5）应用4中获得二分胚①和②，移植到受体牛中得到两只小牛，两只小牛的性别是     。
（6）如果体外受精后，在精核与卵核融合之前，用微型吸管除雄核，再用细胞松弛素B处理（作用类似于用秋水仙素处理植物细胞），处理后的受精卵可发育成小鼠。这种方法在动物新品种选育中的显著优点是                    。
（7）如果将外源基因导入牛受精卵，则外源基因可能随机插入到牛受精卵DNA中。这种受精卵有的可发育成转基因牛，有的却死亡。请分析因外源基因插入导致受精卵死亡的最可能原因                                               （2分）

（11分）回答有关“试管婴儿”的问题：
(1) “试管婴儿”在生物学上所依据的原理是        

（6分）Ⅰ．血糖浓度是人体健康状况的重要指标之一，多种激素参与血糖浓度的调节。
（1）血糖浓度的正常范围是          mg/dL。胰岛素分泌不足引起的糖尿
病患者由于         发生障碍，体内脂肪和蛋白质分解加强，导致机
体消瘦。血糖含量过低导致惊厥和昏迷时，应及时给患者静脉输入   
          以缓解症状。
（2）下图中，三条曲线分别表示进食后血液中胰岛素和胰高血糖素相对含量的变化。其中表示糖尿病患者胰岛素变化趋势的是曲线     ，表示健康人胰高血糖素变化趋势的是曲线       。

（3）体检时，测量血糖应在空腹时进行，其生理学理由是排除进食后                  的干扰。
Ⅱ．（8分）萤火虫能发光是因为萤火虫体内通过荧光素酶催化的系列反应所产生的现象。如果荧光素酶存在于植物体内，也可使植物体发光。一直以来，荧光素酶的唯一来源是从萤火虫腹部提取。但加利福尼亚大学的一组科学家成功地通过转基因工程将荧光素酶基因导入到大肠杆菌体内，并在大肠杆菌体内生产荧光素酶。请你根据已有的知识回答下列有关问题：
（1）在此转基因工程中，目的基因是                ，提取目的基因的途径通常有两条，提取该目的基因的途径最可能是                    。
（2）将此目的基因导入到大肠杆菌体内需要运载体的帮助。下列选项是选取运载体的时候必须考虑的有                。
A．能够在宿主细胞内复制并稳定保存                B．具有特定的限制酶切点
C．具有与目的基因相同的碱基片断                  D．具有某些标记基因
（3）下列可作为受体细胞的生物有          。
A．土壤农杆菌         B．结核杆菌        C．噬菌体          D．枯草杆菌
（4）在此转基因工程中，常用质粒作为运载体；在将体外重组DNA导入大肠杆菌体内之前通常要用           处理大肠杆菌，目的是                      ，使重组基因能够导入受体细胞。（5）由于荧光素酶的特殊作用，人们一直设想将其基因作为实验工具，将它和某一基因连接在一起，通过植物是否发光来确定该基因是否已经转入到植物体内，如判断固氮基因是否成功导入某植物体内。正常根瘤菌体内的固氮基因与萤火虫体内的荧光素酶基因相比，除了碱基对的顺序、数目不同以外，在结构方面还存在不同点，主要不同是                                ，而荧光素酶基因的编码区是间隔、不连续的。
（6）与杂交育种、诱变育种相比，通过基因工程来培育新品种的主要优点是                  
                                                                。

（7分）絮凝性细菌分泌的具有絮凝活性的高分子化合物，能与石油污水中的悬浮颗粒和有机物等形成絮状沉淀，起到净化污水的作用。为进一步提高对石油污水的净化效果，将絮凝性细菌和石油降解菌融合，构建目的菌株。其流程图如下。

据图回答：
（1）溶菌酶的作用是                               。
（2）PEG的作用是                                。
（3）经处理后，在再生培养基上，未融合的A、B难以生长。图中AB融合菌能生长和繁殖的原因是                                                             。
（4）目的菌株的筛选：筛选既能分泌具有絮凝活性的化合物，又能在含有                 的培养基上生长的AB融合菌，选择效果最好的最为目的菌株。
（5）为探究目的菌株不同发酵时间发酵液的絮凝效果，将目的菌株进行发酵培养，定时取发酵液，加入石油污水中：同时设置                              为对照组。经搅拌、静置各3分钟后，分别测定上层水样的石油浓度COD值（COD值越高表示有机物污染程度越高）,计算石油去除率和COD去除率，结果如下图。

（6）目的菌的种群增长曲线是                           型。在40～44小时，发酵液对石油污水的净化效果最好，其原因是                                                       。

（8分）番茄营养丰富，是人们喜爱的一类果蔬。但普通番茄细胞中含有多聚半乳糖醛酸酶基因，控制细胞产生多聚半乳糖醛酸酶，该酶能破坏细胞壁，使番茄软化，不耐贮藏。为满足人们的生产生活需要，科学家们通过基因工程技术，培育出了抗软化、保鲜时间长的

番茄新品种。操作流程如图，请回答：
(1)在番茄新品种的培育过程中，将目的基因导入受体细胞的方法最可能叫做           
(2)从图中可见，mRNAl和mRNA2的结合直接导致了           无法合成，最终使番茄获得了抗软化的性状。
(3)普通番茄细胞导入目的基因后，经③过程形成              ，然后诱导出试管苗，进一步培养成正常植株。

（11分）.香蕉原产热带地区，是我国南方重要的经济作物之一。广东省冬季常受强寒潮和霜冻影响，对香蕉生长发育影响很大。由香蕉束顶病毒（BBTV，单链环状DNA病毒）
引起的香蕉束顶病，对香蕉生产的危害十分严重。当前香蕉栽培品种多为三倍体，由于无性繁殖是香蕉繁育的主要方式，缺少遗传变异性，因此利用基因工程等现代科技手段提高其种质水平，具有重要意义。请根据上述材料，回答下列问题：
（1)简述香蕉大规模快速繁殖技术的过程。
（2）脱毒香蕉苗的获得，可采用                 的方法，此方法的依据是                 
和                                             。
(3）建立可靠的BBTV检测方法可以监控脱毒香蕉苗的质量，请问可用哪些方法
检测病毒的存在？（列举两种方法）
(4)在运用转基因香蕉的过程中，在生态安全方面可能会出现什么问题？（列举两点）
（5)抑制果胶裂解酶的活性可以延长香蕉果实储藏期，请描述采用蛋白质工程技术降低该酶活性的一般过程。

（11分）．自然情况下，牛的生育率很低，通过现代科技手段，可以实现良种牛的快速繁殖。请按照提示，回答下列问题：
(1)现有一头良种雄性黄牛，请你提供一种简便的方法，使这头公牛在一年内繁殖数千头自己的后代。
(2)现有一头良种雌性黄牛，采用胚胎移植的方法，可使这头良种牛一年生下数十头自己的后代。下图为牛胚胎移植的基本程序，请据图回答：

①图中a、b、c过程分别是指 ____________、________________、 __________。
②在胚胎移植过程中，供、受体母牛选择好后，要用________激素进行同期发情处理,这样处理的原因是 ：                                                    
                                                                       。
③为了提高牛胚胎的利用率，常采取的方法是               ；处理的时期是            。
④从哺乳动物早期胚胎或原始性腺中分离出来的细胞，称为ES或EK细胞。这类细胞的形态特征有                                      。
⑤科学家们正试图利用此类细胞来进行动物克隆或人体器官的克隆，以解决医疗难题。请问：以干细胞为克隆材料优于一般体细胞的理由是，干细胞具有较高的           。新生婴儿脐血中含有大量的造血干细胞，从免疫学角度分析，脐血自身移植的优点有                        。