CTAB法是一种从高等真核生物细胞中制备基因组DNA(总DNA)的技术。CTAB

能跟核酸形成复合物,在高盐溶液(>0.7mol/L的NaCl溶液)中可溶并且稳定存在,当降低溶液中盐的浓度(<0.3mol/L的 NaCl溶液),CTAB - 核酸的复合物就会因溶解度降低而沉淀,再用70% 酒精浸泡可洗脱掉CTAB;氯仿能使蛋白质发生变性而沉淀。提取和检测水稻基因组DNA的操作步骤如下:

① 在50ml离心管中加入20mlCTAB抽提缓冲液(主要成分是1.4mol/L 的NaCl、2%的CTAB),于65℃水浴中预热;

② 将20 g新鲜的水稻幼嫩叶片剪成小段后放于研钵中,用液氮速冻并研磨成粉末,加入

上述离心管中,于65℃水浴中保温30min;

③ 取出离心管中,冷却至室温,加入20mL的氯仿,轻轻混匀20min;

④ 在室温下以 12000r/min的转速离心10-20 min;

⑤ 将上清液移入另一个离心管中,加入2/3体积的经冷却的异丙醇,用玻璃棒轻轻搅动,

小心取出聚集于玻璃棒上的CTAB - 核酸的复合物沉淀;

     ⑥ 将沉淀移入另一个离心管中,加入70%乙醇洗涤,重复洗涤1-2次;

⑦ 吹干乙醇后,将DNA溶于适量的TE缓冲液中,在0.8%的琼脂糖凝胶上电泳分离并在

核酸紫外检测仪上观察。

请回答下列问题:

(1)植物基因组DNA(总DNA)的提取通常采用机械研磨的方法,常温下研磨时,植物细胞

匀浆含有多种酶类对DNA的提取产生不利的影响。用液氮速冻,材料在研磨时易于破

碎,同时还具有  ▲  的作用。

(2)实验步骤③ 、④的目的是  ▲ 

(3)实验步骤⑤中,玻璃棒上出现沉淀的主要原因是  ▲ 

(4)对DNA进行定性检测常用的试剂是   ▲   。琼脂糖凝胶电泳是利用待分离样品

中各种分子带电性质的差异以及  ▲    ▲  ,使带电分子产生  ▲ 

而实现分离。DNA在260nm的紫外线波段有一强烈的吸收峰,利用核酸紫外检测仪

可以进行  ▲ 

 

 

 

 0  29247  29255  29261  29265  29271  29273  29277  29283  29285  29291  29297  29301  29303  29307  29313  29315  29321  29325  29327  29331  29333  29337  29339  29341  29342  29343  29345  29346  29347  29349  29351  29355  29357  29361  29363  29367  29373  29375  29381  29385  29387  29391  29397  29403  29405  29411  29415  29417  29423  29427  29433  29441  170175 

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