【题目】CRISPR/Cas9系统是由Cas9蛋白(一种核酸酶)和sgRNA(向导RNA)构成的RNA-蛋白复合体,可利用sgRNA识别并结合特定DNA序列,引导Cas9蛋白对目的基因进行编辑(如图所示)。RuBisCo是参与光合作用的关键酶,研究人员拟利用CRISPR/Cas9技术对大豆细胞RuBisCo基因进行定点编辑,以达到提高CO2利用率的目的,回答下列问题:


1)利用CRISPR/Cas9系统进行基因编辑时,Cas9蛋白可催化_______________(化学键名称)水解,剪切特定DNA片段,因此Cas9蛋白的这一功能与_______________酶相似。

2)用于编辑不同基因的CRISPR/Cas9复合物中sgRNA碱基序列不同,因此首先要确定RuBisCo基因中的待编辑序列,根据_______________原则设计引物,通过_______________技术扩增相应的基因序列,作为编码特定sgRNA的模板。该技术所需的Taq酶特点是_______________,能使整个反应体系中DNA解链、退火、链的延伸都能快速进行。

3)将扩增获得的DNA片段与_______________基因共同导入到质粒载体,构建CRISPR/Cas9表达载体,将构建成功的表达载体通过_______________方法,导入大豆细胞。若检测到受体细胞中组成RuBisCo酶的氨基酸_______________发生了符合预期的改变,则表明基因编辑成功。

4CRISPR/Cas9系统在定点编辑基因时仍存在一个最大的弊端,就是有很大概率会造成其他一些非目的基因序列的错误剪接和编辑,请尝试分析其原因_______________

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