【题目】下列有关酶的探究实验的叙述,错误的是( )
选项 | 探究内容 | 实验方案 |
A | 酶的高效性 | 用和过氧化氢酶分别催化等量分解,待完全分解后,检测产生的气体总量 |
B | 酶的专一性 | 用淀粉酶催化淀粉水解,检测是否有大量还原糖生成 |
C | 温度对酶活性影响 | 用淀粉酶分别在100℃、60℃和0℃下催化淀粉水解,充分反应后,用碘液检测淀粉水解程度 |
D | pH对酶活性的影响 | 用淀粉酶在不同pH条件下催化淀粉水解,用斐林试剂检测 |
A.AB.BC.CD.D
【题目】癌细胞表面蛋白“PDL-1”与T细胞表面蛋白“PD-1”特异性结合后,可抑制T细胞活性并启动其凋亡,导致肿瘤细胞发生免疫“逃逸”。研究者对“PD-1”基因进行克隆、表达及生物学活性鉴定,为制备抗体打基础。研究中所用引物α和β碱基序列见图1、几种常用限制酶名称及识别序列与酶切位点见图2:
α链:5'-T C A C T C G A G A C C A T G C A G A T C C C A C A G G C G C C C-3' β链:5'-C T C G A A T T C T C A G A G G G G C C A A G A G C A G T G-3' 图1 |
(1)首先提取细胞中的mRNA反转录生成____________________作为模板;设计含有不同的限制酶切点的α和β序列为引物,通过____________________技术扩增目的基因。
(2)选用图1中的两种名称分别为____________________的限制酶将“pIRES2-EGFP质粒”载体进行双切,再用DNA连接酶将其与目的基因拼接,构建表达载体。该表达载体的组成,除了目的基因、标记基因抗卡那霉素基因外,还必须具有____________________等。
(3)而后一定温度下,与经过处理的感受态大肠杆菌混合培养在含有_____________培养基中,可筛选出已经完成转化的大肠杆菌,继续培养该种大肠杆菌以扩增重组DNA。
(4)将扩增后的“pIRES2-EGFP载体/PD-1重组DNA”转入可高度表达外源基因的原代293T细胞。一段时间后,为确定PD-1基因是否表达,检测细胞膜表面是否具有____________________。为判断其是否具有生物学活性和功能,则可裂解293T细胞,提取该物质看能否与____________________发生结合,从而阻断“PD-1与PDL-1信号通路”。研究中还会有一步骤,只将“pIRES2-EGFP载体”转入293T细胞,其目的是_________________________。