【题目】癌细胞表面蛋白“PDL-1”与T细胞表面蛋白“PD-1”特异性结合后,可抑制T细胞活性并启动其凋亡,导致肿瘤细胞发生免疫“逃逸”。研究者对“PD-1”基因进行克隆、表达及生物学活性鉴定,为制备抗体打基础。研究中所用引物αβ碱基序列见图1、几种常用限制酶名称及识别序列与酶切位点见图2

α链:5'-T C A C T C G A G A C C A T G C A G A T C C C A C A G G C G C C C-3'

β链:5'-C T C G A A T T C T C A G A G G G G C C A A G A G C A G T G-3'

1

1)首先提取细胞中的mRNA反转录生成____________________作为模板;设计含有不同的限制酶切点的αβ序列为引物,通过____________________技术扩增目的基因。

2)选用图1中的两种名称分别为____________________的限制酶将“pIRES2-EGFP质粒”载体进行双切,再用DNA连接酶将其与目的基因拼接,构建表达载体。该表达载体的组成,除了目的基因、标记基因抗卡那霉素基因外,还必须具有____________________等。

3)而后一定温度下,与经过处理的感受态大肠杆菌混合培养在含有_____________培养基中,可筛选出已经完成转化的大肠杆菌,继续培养该种大肠杆菌以扩增重组DNA

4)将扩增后的“pIRES2-EGFP载体/PD-1重组DNA”转入可高度表达外源基因的原代293T细胞。一段时间后,为确定PD-1基因是否表达,检测细胞膜表面是否具有____________________。为判断其是否具有生物学活性和功能,则可裂解293T细胞,提取该物质看能否与____________________发生结合,从而阻断“PD-1PDL-1信号通路”。研究中还会有一步骤,只将“pIRES2-EGFP载体”转入293T细胞,其目的是_________________________

 0  168319  168327  168333  168337  168343  168345  168349  168355  168357  168363  168369  168373  168375  168379  168385  168387  168393  168397  168399  168403  168405  168409  168411  168413  168414  168415  168417  168418  168419  168421  168423  168427  168429  168433  168435  168439  168445  168447  168453  168457  168459  168463  168469  168475  168477  168483  168487  168489  168495  168499  168505  168513  170175 

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