【题目】P450是石油降解的关键酶,用SalⅠ和NdeⅠ联合酶切获得的P450基因,与下图所示的质粒(pCom8)重组,导入土著菌种Y9,获得了基因工程菌P450/Y9。图中mel是黑色素合成基因,该基因表达能使白色的菌落变成黑色,aacCl是庆大霉素(一种抗生素)抗性基因,限制酶NdeⅠ、XhoⅠ和SspⅠ在该质粒上均只有一个酶切位点。下表表示几种限制酶的识别序列和切割位点,据图回答下列问题:
![]()
限制酶 | SalⅠ | Nde Ⅰ | Xho Ⅰ | Ssp Ⅰ |
识别序列及切割位点 |
|
|
|
|
(1)构建pCom8重组质粒时,需要用__________________________(限制酶)对图示质粒进行处理,才能与__________________________在DNA连接酶的作用下形成重组质粒。基因工程中用两种不同的限制酶切割目的基因和质粒,获得不同的黏性末端的主要目的是防止_________________________和反向连接。
(2)为了扩增重组质粒,需将其转入用__________预先处理的土著菌种Y9中,提高质粒导入率,以便获得更多基因工程菌P450/Y9。为了筛选出转入了重组质粒的基因工程菌P450/Y9,应在筛选平板培养基中添加______________。作为载体的质粒除了含有标记基因,还应该含有____________________(至少写两个)。
(3)为检测基因工程菌降解石油能力的大小,可观测的指标是____________________________。土著菌种Y9不能降解石油,但转入上述构建好的表达载体后则获得降解石油的能力,这是因为________________。