【题目】华蟾素是我国经典抗肿瘤药物。研究人员为探寻华蟾素注射液抗肝癌细胞的作用机理,进行了一系列实验。请根据图中信息回答下列问题。
Ⅰ.肝癌细胞的培养
(1)培养肝癌细胞时,在培养基中加入适量的___________以补充合成培养基中缺乏的物质,为防止培养过程发生污染要加入___________。此外,每48h更换1次培养液,目的是___________;同时还要提供适宜的温度、___________、氧气和二氧化碳等环境条件。
Ⅱ.探究华蟾素药效作用机理的实验:
(2)DNA拓扑异构酶Ⅱ(简称TopoⅡ)为真核生物所必需,在DNA复制、转录等方面发挥重要作用,TopoⅡ在肿瘤细胞中含量明显高于正常细胞。华蟾素注射液处理细胞48h后,采用逆转录-聚合酶链式反应技术检测TopoⅡ基因的表达情况,结果如表。
华蟾素浓度(μg/ml) | 0 | 0.105 | 0.21 | 0.42 |
TopoⅡ基因表达量 | +++++ | ++++ | ++ | + |
①逆转录-聚合酶链反应的主要原理是:提取肝癌细胞中的总RNA,在___________酶的作用下合成cDNA,再以cDNA为模板进行PCR扩增,为完成该反应还需要添加______________________________________。
②由上可知,华蟾素注射液在分子水平上影响肝癌细胞的机理是_______________________________。