1.研究人员从血管内皮瘤中发现了一种新的血管增生抑制剂--内皮抑素,它能有效地抑制血管增生.下面是获得重组内皮抑素的方法,请分析回答下列问题.
(1)从肝细胞中分离总RNA,经反转录获得cDNA,之后经过PCR扩增内皮抑素基因.
(2)扩增的目的基因与pUC18质粒(如图所示)都用EcoRⅠ和BamHⅠ进行双酶切,然后用DNA连接酶进行连接,构建重组质粒.双酶切避免了目的基因与载体反向连接,还减少了目的基因和运载体的自身的连接,提高了重组质粒的比例.
(3)大肠杆菌pUC18质粒的LacZ基因中如果没有插入外源基因,LacZ基因便可表达出β半乳糖苷酶,当培养基中含有IPTG和Xgal时,Xgal便会被β半乳糖苷酶水解成蓝色,大肠杆菌将形成蓝色菌落.反之,则形成白色菌落.选择培养基中除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外,还应加入IPTG、X-gal和氨苄青霉素物质.成功导入重组质粒的大肠杆菌在培养基中形成白颜色的菌落,原因是重组质粒上的LacZ基因已被破坏而不能表达.之所以选择大肠杆菌作为基因工程的受体菌,其突出的优点是:大肠杆菌是单细胞生物,繁殖速度快,遗传物质相对较少.
(4)从选择培养基中挑取所需的单个菌落接种于液体培养基中培养,获得粗提表达产物.将等量毛细血管内皮细胞接种于细胞培养板,37℃培养.将等量不同浓度的粗提表达产物加进培养孔中,72h后在显微镜下观察细胞存活情况并对活细胞进行计数,实验结果如表所示.
粗提表达产物浓度/(μg•mL-10246810
活的内皮细胞数目(×102126210.50.5
实验结果说明内皮抑素能有效地抑制血管增生.
20.萘乙酸(NAA)是生产中常用的植物生长素类似物,在一定浓度范围内(50ppm~500ppm)能促进植物生根,且效果比IAA好,但NAA对不同植物促进生根的最适浓度有较大差异.某校生物兴趣小组的同学想通过实验探究“NAA促进植物扦插枝条生根的最适浓度”,请帮助他们完成实验步骤并分析实验结果:
实验材料:1000ppm的NAA原液加清水稀释到浓度分别为100ppm、200ppm和300ppm的NAA溶液,茉莉花、栀子花、金钱松枝条,其他必要材料.
(1)实验步骤:
①取250mL烧杯4个,编号.然后,1~3号分别加入100ppm、200ppm、300ppm的NAA溶液50mL,4号加入等量清水作为对照.
②选长势相当的扦插枝条若干(长15cm左右,留顶部2~3片叶,基部的剪除),随机均分为4组,每组10枝,分别将基部浸入各烧杯溶液中,时间为1小时.
③将各组枝条分别插入沙土中,在适宜条件下培养.
④一个月后,观察各组插条生根情况、统计成活枝条数量,计算成活率.
(2)实验结果:3组同学分别用不同植物进行实验,结果如下:
1002003000(对照)
茉莉花7752
栀子花10101010
金钱松0000
(3)结果分析:NAA浸泡对茉莉花插条生根的促进效果较好,而另两组未达到实验的预期效果.请分析可能的原因:
栀子花:自身产生的IAA很多(或生根对IAA的要求很低),在不添加外源NAA的条件下,插条存活率很高.
金钱松:促进生根所要求的NAA浓度很高,300ppm远未达到其促进浓度.
(4)另一名同学用带芽的柳树枝条做了类似的实验,实验组的实验结果如图所示,但另一个同学研究了他的实验过程后,认为他的实验中自变量的控制中有关步骤不够准确,之所以做出这种分析,你认为可能的原因是芽可以产生生长素,插条上芽的数目及饱满程度影响了实验结果;不同浓度的NAA处理插条时间的长短影响了实验结果(或浸泡处理时没有在遮阴和空气湿度较高的地方进行)(至少写出两个).
 0  137537  137545  137551  137555  137561  137563  137567  137573  137575  137581  137587  137591  137593  137597  137603  137605  137611  137615  137617  137621  137623  137627  137629  137631  137632  137633  137635  137636  137637  137639  137641  137645  137647  137651  137653  137657  137663  137665  137671  137675  137677  137681  137687  137693  137695  137701  137705  137707  137713  137717  137723  137731  170175 

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