19.某质粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三种限制酶切割位点,它们的识别序列和黏性末端各不相同.质粒同时也含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因.利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示,请回答下列问题.

(1)将抗盐基因导入烟草细胞内,使烟草植株产生抗盐性状,这种变异属于基因重组.
(2)如果将抗盐基因直接导入烟草细胞,一般情况下,烟草不会具有抗盐特性,原因是抗盐基因在烟草细胞中不能稳定存在并表达.
(3)在构建重组质粒时,应选用SalⅠ和HindⅢ两种酶对质粒和含抗盐基因的DNA进行切割,以保证重组DNA序列的唯一性.
(4)基因工程中的检测筛选是一个重要的步骤.为筛选出导入了重组质粒的农杆菌,下图表示运用影印培养法(使一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种接种培养方法)检测基因表达载体是否导入了农杆菌.

培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外,培养基A和培养基B分别还含有氨苄青霉素、四环素(氨苄青霉素和四环素).从检测筛选的结果分析,含有目的基因的是4和6(填数字)菌落中的细菌.为了确定抗盐烟草是否培育成功,既要用标记的含抗盐基因的DNA片段作探针进行分子杂交检测,又要用一定浓度的盐水浇灌烟草植株(将烟草植株移栽到盐碱地中)的方法从个体水平鉴定烟草植株的耐盐性.
(5)将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用植物组织培养技术,愈伤组织经再分化进而形成完整植株,此过程除营养物质外还必须向培养基中添加植物激素(生长素和细胞分裂素).
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